OscpSRP43參與水稻葉綠體正常發育以及光合作用,OscpSRP43組成性表達,包括根、莖、葉、葉鞘以及穗,在葉片表達量最高。
針對OscpSRP43蛋白PhytoAB研發了PHY4352S。PHY4352S的免疫原為Os03g0131900的一段多肽序列,確定反應物種: Oryza sativa。WB結果如下圖:
首先研究了cpSRP43突變株(chaos)中的TBS蛋白的含量,發現葉綠素合成限速酶-谷氨酰-tRNA 還原酶 (GluTR),鎂離子螯合酶 (MgCh) 的催化亞基CHLH以及MgCh的激活子GUN4的含量顯著下降,表明cpSRP43能夠保護GluTR, CHLH 和GUN4的穩定性。生物熒光互補實驗(BiFC)和體外Pull down實驗證實了它們之間的相互作用。為了弄清楚cpSRP43是如何保護TBS蛋白的穩定性,研究人員進行了體外的蛋白散射分析(Scattering assay),發現cpSRP43能保護TBS蛋白避免在高溫下形成聚集失活。體內實驗,研究人員將野生型和chaos在高溫(42 °C)下處理后檢測cpSRP43對于TBS的熱保護作用,發現缺失了cpSRP43的突變體中TBS蛋白穩定性下降,葉綠素的合成相比野生型下降明顯,進一步證實了cpSRP43對于TBS蛋白的熱保護作用。
葉綠體信號識別粒子 (cpSRP)由亞基 cpSRP43 和 cpSRP54 組成,之前已經知道cpSRP43和cpSRP54形成異源二聚體介導捕光天線蛋白(LHCP)在葉綠體內的運輸和膜整合并且cpSRP54能夠促進cpSRP43去保護LHCP免于聚集失活【4】。在本研究中,研究人員在蛋白散射分析中添加cpSRP54,驚奇地發現cpSRP43對于TBS蛋白的熱保護作用被大大削弱,表明與對LHCP的情形相反, cpSRP54抑制cpSRP43對TBS蛋白的保護作用。為了弄清楚cpSRP54是如何在促進/抑制的兩種角色中轉換的,研究人員研究了溫度對于cpSRP43-cpSRP54互作的影響,發現高溫削弱了 cpSRP54 與 cpSRP43 的相互作用,從而釋放cpSRP43與TBS蛋白互作并保護TBS蛋白。


上樣蛋白分別為5 μL水稻葉綠體蛋白(Os-Chl);
一抗稀釋比例: 1: 5000.