熒光革蘭氏陽性細菌染色試劑盒是美國AAT Bioquest生產的染色細菌的試劑盒，AAT Bioquest的染色試劑盒提供了一種新穎的一步熒光測定法，用于確定活菌中的革蘭氏菌。革蘭氏染色是在臨床和研究環境中對細菌進行分類的重要且廣泛使用的方法。原始方法涉及很多步驟，例如熱固定，兩步染色方案，酒精提取和復染。這些步驟可能會導致不一致的染色。 AAT Bioquest的一站式工具包消除了更多步驟，從而克服了出現的問題。該試劑盒使用了熒光標記的伴刀豆球蛋白A（ConA），這是一種凝集素，可選擇性地與暴露于革蘭氏陽性細菌表面的N-乙酰氨基葡糖結合。當革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌用熒光標記的ConA共軛物染色時，只有革蘭氏陽性菌發出紅色熒光。染色的細菌可以通過熒光監測。因為與其他現有染料相比，我們試劑盒中使用的熒光標記ConA共軛物顯示出更高的亮度和光穩定性。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的熒光革蘭氏陽性細菌染色試劑盒。
適用儀器
| 熒光顯微鏡 | |
| Ex: | 650 nm |
| Em： | 669 nm |
| 推薦孔板: | 黑色透明底板 |
| 濾波片組: | Cy5 濾波片組 |
樣品實驗方案
簡要概述
1.準備細菌樣本
2.準備并添加IF647-ConA
3.在黑暗中于室溫下將細菌樣品與IF647-ConA孵育5-15分鐘
4.去除IF647-ConA染色溶液并重懸于測定緩沖液中
5.使用Cy5濾光片組通過熒光顯微鏡分析樣品
溶液制備
1.儲備溶液配制
所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復凍融循環。
1.1IF647-ConA儲備溶液（100X）：
向IF647-ConA小瓶（組分A）中加入100 µL測定緩沖液（組分B），并充分混合。 注意：將儲備溶液儲存在-20oC，避免光照，并以較小的等分試樣儲存，以避免重復的凍融循環。
樣品示例及操作
1.細菌樣品的制備
1.1在適當的培養基中使細菌生長到對數后期。 準備細菌樣品，濃度范圍為106到108個細胞/ mL。 注意：在波長= 600 nm（OD600）處測量細菌培養物的光密度，以確定細胞數。 對于大腸桿菌培養，OD600 = 1.0等于8 x 108細胞/ mL。
1.2通過以10,000 x g離心5分鐘除去培養基，然后將沉淀重新懸浮在測定緩沖液（組分B）中。
2.染色方案
2.1向100 µL細菌樣品中加入1 µL IF647-ConA儲備溶液（100X）。
2.2充分混合，然后在室溫下于黑暗中孵育5-15分鐘。
2.3以10,000 x g離心5分鐘，然后除去IF647-ConA染色溶液。
2.4重懸于100 µL分析緩沖液（組分B）中。
2.5使用熒光顯微鏡通過Cy5（Ex / Em = 650/669 nm）通道監控細菌的熒光。 注意：該協議僅提供指導，應根據不同的細菌菌株或其他特定需求進行優化。 如果觀察到更高的背景，則可以在成像之前添加一個可選的檢測緩沖液（組分B）洗滌步驟。
