Cell Navigator 線粒體標記試劑盒 綠色熒光 是一套熒光成像工具，用于標記細胞器細胞器，如膜，溶酶體，線粒體和細胞核等。活細胞線粒體的選擇性標記為研究細胞事件提供了一種強有力的方法。這個特定的試劑盒旨在標記藍色熒光的活細胞線粒體。該試劑盒使用專有染料，可根據線粒體膜電位梯度選擇性累積在線粒體中。線粒體指示劑是一種疏水性化合物，可以很容易地滲透完整的活細胞，并在進入細胞后被困在線粒體中。該熒光線粒體指示劑長時間保留在線粒體中，因為該指示劑攜帶細胞保留組。這一關鍵特征顯著提高了染色效率。它可以很容易地適用于各種熒光平臺，如微孔板分析，免疫細胞化學和流式細胞術。它適用于多種研究，包括細胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細胞活力，細胞凋亡和細胞毒性。該試劑盒為所有重要組分提供了優化的細胞標記方案。它適用于增殖和非增殖細胞，可用于懸浮細胞和貼壁細胞。Cell Navigator 線粒體標記試劑盒 綠色熒光 是美國AAT Bioquest研發的產品。
適用儀器
| 熒光顯微鏡 | |
| Ex: | FITC 濾波片組 |
| Em： | FITC 濾波片組 |
| 推薦孔板: | 黑色透明底板 |
樣品分析
1.準備線粒體染色溶液：
1.1將所有組件溫度調至室溫。
1.2通過將20μLMitolite Green（組分A）稀釋到10mL活細胞染色緩沖液（組分B）中制備染料工作溶液。
注1：對于一個96孔板，20μL的500X Mitolite Green（組分A）就足夠了。在≤-20oC下等分并儲存未使用的500X Mitolite Green。避光，避免反復凍融循環。
注2：熒光線粒體指示劑的濃度根據具體應用而變化。可以根據特定細胞類型和細胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件。
2.準備和染色細胞：
2.1對于粘附細胞：在96孔黑色墻壁/透明底板上或在裝有適當培養基的培養皿內的蓋玻片上培養細胞。當細胞達到所需的匯合時，加入等體積（例如對于96孔板為100μL，對于384孔板為25μL）的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37oC，5％CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長培養基緩沖液）替換染料上樣溶液。
注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。
2.2對于懸浮細胞：以1000rpm離心細胞5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預熱（37℃）生長培養基中輕輕重懸細胞沉淀，并加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37oC，5％CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長培養基緩沖液）替換染料上樣溶液。
注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或培養時間以使染料積累。
注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為粘附細胞染色（見步驟2.1）。
圖1.使用Cell Navigator™線粒體染色試劑盒染色的U2OS細胞圖像* Costar黑色96孔板中的綠色熒光*
