LysoBrite 溶酶體橙色熒光探針 ，用于標記活細胞的溶酶體。專有的溶解性染料可能通過溶酶體pH梯度選擇性地積聚在溶酶體中。 溶質(zhì)指示劑是疏水性化合物，易于滲透完整的活細胞，并在進入細胞后被捕獲在溶酶體中。 進入溶酶體后，LysoBrite 試劑的熒光明顯增強。 可以使用熒光成像，高含量成像，酶標儀熒光測定法或流式細胞術檢測熒光。 LysoBrite 橙色，紅色，深紅色和NIR試劑具有*的光穩(wěn)定性和優(yōu)異的細胞保留性，可用于各種研究，包括細胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細胞活力，細胞凋亡和細胞毒性。 它們適用于增殖和非增殖細胞，可用于懸浮細胞和貼壁細胞。溶酶體是細胞器，其含有酸水解酶以分解廢物和細胞碎片。 溶酶體消化多余的或破舊的細胞器，食物顆粒和吞噬的病毒或細菌。 溶酶體周圍的膜允許消化酶在pH4.5下工作。 與微堿性胞質(zhì)溶膠（pH 7.2）相比，溶酶體的內(nèi)部是酸性的（pH 4.5-4.8）。 溶酶體通過質(zhì)子泵和氯離子通道從細胞質(zhì)中泵送質(zhì)子穿過膜來維持這種pH差異。LysoBrite 溶酶體橙色熒光探針 是美國AAT Bioquest研發(fā)的產(chǎn)品。
使用LysoBrite 染料的分析方案
概述
準備細胞
添加染料工作溶液
在37°C孵育30分鐘
洗滌細胞
在熒光顯微鏡下分析
注：該方案僅提供指南，應根據(jù)您的具體需求進行修改。
操作方法
1.制備溶酶體染色溶液：
1.1解凍 LysoBrite 染料至室溫。
1.2通過將20μL的500 X LysoBrite 染料稀釋到10 mL Hanks和20 mm Hepes緩沖液或緩沖液（HBSS）中，制備染料工作溶液。
注1：對于一個96孔板，20μL的LysoBrite 染料就足夠了。 在<-15℃下等分并儲存未使用的LysoBrite 染料儲備溶液。 保護它免受光照，避免反復凍融循環(huán)。
注2：熒光溶酶體指示劑的濃度根據(jù)具體應用而變化。 可以根據(jù)特定細胞類型和細胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件。
2.準備和染色細胞：
2.1貼壁細胞：a.在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在裝有適當培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)的蓋玻片上培養(yǎng)細胞。當細胞達到所需的匯合時，加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。 b.將細胞在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘。 c.用預熱（37℃）Hanks和20mM Hepes緩沖液（HBSS）或您選擇的緩沖液洗滌細胞兩次，用HBSS或生長培養(yǎng)基填充細胞孔。 d.使用配有所需濾光片組的熒光顯微鏡觀察細胞。
注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。
2.2對于懸浮細胞：a.將等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）加入細胞中。將細胞在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘。 b.用預熱（37℃）Hanks和20mM Hepes緩沖液（HBSS）或您選擇的緩沖液洗滌細胞兩次，用HBSS或生長培養(yǎng)基填充細胞孔。 c.使用配備有所需過濾器組的熒光顯微鏡觀察細胞。
注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或培養(yǎng)時間以使染料積累。
注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為粘附細胞染色（見步驟2.1）。
