ReadiUse 去除樣本蛋白試劑盒 氨基酸，離子，代謝物和其他小分子的分析經常受生物流體，細胞和組織裂解物中存在的脂質，蛋白質和酶的干擾而阻礙。 因此，在生物樣品分析之前，脫蛋白是許多程序中的必要步驟。 AAT Bioquest的脫蛋白樣品制備試劑盒提供了一種快速去除生物樣品中蛋白質的方法。 通過應用三（TCA）沉淀蛋白質。 除去沉淀的蛋白質后，用中和溶液中和樣品的pH。 基于TCA的脫蛋白已成功且廣泛用于樣品制備之前，對小分子（例如糖原，ATP，cAMP，*和抗氧化劑）進行定量。 該試劑盒中提供的TCA方法也可用于大規模去除蛋白質。 使用ReadiUse 去除樣本蛋白試劑盒 制備的生物樣品可直接用于各種生化分析。
樣品實驗方案
1.蛋白質沉淀：
1.1均質和離心后，制備蛋白濃度小于50 mg / mL的澄清溶液樣品。 將蛋白質樣品放在冰上。 注意：高蛋白濃度的樣品可能需要稀釋。
1.2向100 µL蛋白質樣品中加入10 µL冷的TCA（組分A）并短暫渦旋混合均勻。
1.3將樣品在冰上放置10分鐘。 以12,000 rpm離心5分鐘。 將上清液（去蛋白樣品）轉移到另一個試管中。 注意：建議中和TCA中的樣品，并立即用于相關測定。 但是，TCA中的脫蛋白樣品可以在-70°C下保存長達一個月。
2.TCA中和：
2.1要中和過量的三氯yi酸，可在收集的上清液中加入10 µL冷中和溶液（組分B），并短暫渦旋混合均勻。
2.2將樣品在冰上放置5分鐘。 現在將樣品脫蛋白并中和。
2.3（可選）讀取280 nm（OD）處的吸光度以檢查樣品是否脫蛋白。
樣品示例
添加TCA和中和溶液（總體積約120 µL）可稀釋原始樣品（初始樣品體積為100 µL）中的蛋白質濃度。 稀釋系數可以通過以下公式計算：
原始蛋白質濃度％=（初始樣品體積）/（初始樣品體積+ TCA體積+中和溶液體積）
| 圖1.基于TCA的蛋白質樣品的脫蛋白。 使用ReadiUse TCA脫蛋白測試樣品制備試劑盒（Cat＃19501）對蛋白濃度低于50 mg / mL的牛血清白蛋白（BSA）樣品和約14.2 mg / mL的兔血清樣品進行脫蛋白處理。 用TCA方法去除了所有樣品中超過98％的蛋白質。 |
