線粒體是細胞超氧化物的主要生產者。低中等水平的超氧化物的產生對于許多重要細胞過程的適當調節至關重要，這些過程包括基因表達，信號轉導和肌肉對耐力運動訓練的適應性。不受控制的線粒體超氧化物的產生會觸發細胞氧化損傷，從而導致多種疾病的發病機理，包括癌癥，心血管疾病，神經退行性疾病和衰老。Cell Meter 熒光法線粒體過氧化物檢測試劑盒使用我們*的超氧化物指示劑來定量活細胞中的超氧化物水平。MitoROS 580具有活細胞滲透性，可以快速，選擇性地靶向線粒體中的超氧化物。與超氧化物反應時會生成紅色熒光。該檢測試劑盒提供了一種靈敏的一步熒光測定法，可在培養一小時后檢測活細胞中的線粒體超氧化物。該試劑盒針對流式細胞儀應用進行了優化。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Cell Meter 熒光法線粒體過氧化物檢測試劑盒。
適用儀器
| 流式細胞儀 | |
| Ex: | 488 nm |
| Em： | 575/26 nm |
| 通道: | PE 通道 |
樣品實驗方案
簡要概述
準備細胞密度為0.5-1×10 6細胞/ mL
用測試化合物處理細胞以誘導超氧化物
將1 µL 500X MitoROS 580加到0.5 mL細胞懸液中
將細胞在37°C染色1小時
使用帶有FL2通道的流式細胞儀檢測熒光強度
溶液配制
儲備溶液配制
1. MitoROS 580儲備溶液（500X）：將100 µL DMSO（組分C）添加到MitoROS 580（組分A）小瓶中，并充分混合以制成500X MitoROS 580儲備溶液。避光。注意：請密閉存放。
實驗步驟
對于每個樣品，在自備的0.5 mL生長培養基或緩沖液中制備細胞，密度為5×10 5至1×10 6個細胞/ mL。注意：應單獨評估每種細胞系，以確定超氧化物誘導的細胞密度。
在分析緩沖液（組分B）或自備的緩沖液（例如PBS）中用25 µL 20X測試化合物處理細胞以誘導超氧化物。對于對照細胞（未處理的細胞），添加相應量的化合物緩沖液。
將細胞在37°C孵育至少30分鐘。注意：將 Jurkat細胞在37°C下用50 µM抗霉suA（AMA）處理30分鐘以誘導超氧化物。有關詳細信息，請參見圖1。
將0.5 µL細胞懸浮液中加入1 µL 500X MitoROS 580儲備液。
在37°C下孵育1小時。注意：對于貼壁細胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞完整，并在MitoROS 580孵育之前用含血清的培養基洗滌一次。適當的孵育時間取決于單個細胞的類型和測試使用的化合物。
使用帶有FL2通道的流式細胞儀（Ex / Em = 488/590 nm）檢測熒光強度。
