橙色熒光示蹤探針 CytoTrace CMTMR CytoTrace 橙色CMTMR在化學上與CellTracker 橙色CMTMR相同。CytoTrace Orange CMTMR可以自由地穿過細胞膜進入細胞，然后轉化為不滲透細胞膜的反應產物。CytoTrace Orange CMTMR染料可以在活細胞中保留數代。染料轉移到子細胞中，但不轉移到種群中的相鄰細胞中。CytoTrace 橙色CMTMR染料旨在顯示至少72小時的熒光，并且該染料具有理想的跟蹤特性。CMTMR染料穩定，在工作濃度下無毒，在細胞中保留良好，并且在生理pH下發出明亮的熒光。此外，CytoTrace 橙色CMTMR染料的激發和發射光譜與GFP（綠色熒光蛋白）已很好地分離，并且可以進行多重光譜。
橙色熒光示蹤探針 CytoTrace CMTMR
操作步驟
該協議僅提供指南，應根據您的特定需求進行修改。
1.準備2-10 mMDMSO儲備溶液
對于＃22014添加45微升DMSO成50 μ 克小瓶使2mM的儲備溶液（1毫克/毫升，相當于1.8毫摩爾）;
對于＃22015添加36微升DMSO成50 μ 克小瓶制成10mM儲備溶液（1毫克/毫升，相當于1.46毫摩爾）;
對于＃22016，添加153 uL ml DMSO以制成10 mM儲備溶液（1 mg / ml相當于1.53 mM）；
對于＃22017，添加215μLDMSO以制成10 mM儲備溶液（1 mg / ml相當于2.15 mM）;
對于＃22020，將4.2 mg溶于1 ml DMSO中制成10 mM儲備溶液（1 mg / ml相當于?2.4 mM）；
注意：儲備溶液應及時使用；應將所有剩余的溶液等分并在< -20 o C下冷凍。避免重復凍融循環，并避光
2.準備染料工作液
在使用前，通過用Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的pH 7緩沖液稀釋步驟1中的DMSO儲備溶液，準備好1至20 µM的染料工作溶液。
3.用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞：
3.1用測試化合物處理細胞所需的時間。
3.2離心細胞，每管得到2-10 x105細胞。
3.3將細胞重懸于500 µL 的染料工作溶液中（來自步驟2）。
3.4將細胞與染料溶液在室溫或37° C下避光放置15至30分鐘。
3.5從細胞中除去染料工作溶液，用HHBS或您選擇的緩沖液洗滌細胞。將細胞重懸于500 µL預熱的HHBS或培養基中，每管可得到2-10 x 10 5個細胞。
3.6用流式細胞儀（FL1通道） 或熒光顯微鏡監測Ex / Em = 490/520 nm處的熒光變化。
注意：對于細菌細胞染色：將母液在通過測試細菌過夜生長而預先調節的營養肉湯中以1：800的比例稀釋時，染色是有效的，但是也可以使用新鮮的營養肉湯或PBS。細菌懸浮液應用PBS稀釋至105 - 10 7每毫升。將1 ml溶液加到.45 µm過濾器（25mm）上并真空過濾除去溶液，然后加入1ml染料溶液并在室溫下孵育5-10分鐘，即可對細菌染色。
