Amplite 熒光法通用型蛋白酶活性檢測試劑盒 蛋白酶測定法廣泛用于蛋白酶抑制劑的研究和蛋白酶活性的檢測。監測各種蛋白酶活性已成為許多生物實驗室的常規任務。 一些蛋白酶已被確定為良好的藥物開發目標。
我們的Amplite 通用熒光蛋白酶活性檢測試劑盒是進行常規檢測分離蛋白酶或鑒定蛋白質樣品中污染蛋白酶的理想選擇。該試劑盒使用熒光酪蛋白偶聯物，其被證明是廣譜蛋白酶（例如*，*，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和彈性蛋白酶）的通用底物。在完整的底物中，酪蛋白用綠色熒光染料嚴重標記，導致顯著的熒光猝滅。蛋白酶催化的水解減輕了其猝滅效應，產生明亮的熒光染料標記的短肽。熒光強度的增加與蛋白酶活性成正比。 該測定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行，并且易于適應自動化。使用FITC濾光片組，可以使用熒光酶標儀在Ex / Em = 490/525 nm下輕松讀取其信號。百螢生物為您提供優質的Amplite 熒光法通用型蛋白酶活性檢測試劑盒。
方案一：一個96孔板的測定方案
以下說明書僅提供指南，實際應根據您的具體需求進行修改。
概述
準備蛋白酶底物溶液（50μL）
加入底物對照，陽性對照或測試樣品（50μL）
孵育0分鐘（用于動力學讀數）或30分鐘-1小時（用于終點讀數）
在Ex / Em = 490 / 525nm處監測熒光強度
注意：在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。
操作方法
1.準備工作解決方案：
1.1制備蛋白酶底物溶液：在2X測定緩沖液（組分C）中以1：100稀釋蛋白酶底物（組分A）。在96孔板中每次測定使用50μL蛋白酶底物溶液。
注意：2X分析緩沖液（組分C）設計用于檢測胰凝*蛋白酶，胰*白酶，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白細胞彈性蛋白酶的活性。對于其他蛋白酶，請參閱附錄I了解適當的分析緩沖液配方。
1.2胰*白酶稀釋：在去離子水中以1:50稀釋胰*白酶（5U /μL，組分B），得到濃度為0.1U /μL。
2.根據說明書中的表1和表2，將步驟1中制備的試劑加入96孔微量培養板中。
3.運行酶促反應：
3.1將50μL蛋白酶底物溶液（來自步驟1.1）加入到測定板中的所有孔中，充分混合試劑。
3.2用Ex / Em = 490 / 525nm的熒光板讀數器監測熒光增加。
對于動力學讀數：立即開始連續測量熒光強度，每5分鐘記錄數據30分鐘。
終點讀數：將反應在所需溫度下孵育30至60分鐘，避光，測量熒光強度。
方案二：使用純化酶篩選蛋白酶抑制劑
概述
準備蛋白酶底物溶液（10μL）添加底物對照，陽性對照，載體對照或測試樣品（90μL）
孵育0分鐘（用于動力學讀數）或30分鐘-1小時（用于終點讀數）
監測Ex的熒光強度 / Em = 490 / 525nm
操作方法
1.準備工作解決方案：
1.1制備1X測定緩沖液：將5mL去離子水加入5mL 2X測定緩沖液（組分C）中。
1.2制備蛋白酶底物溶液：在1X測定緩沖液（來自步驟1.1）中以1:20稀釋蛋白酶底物（組分A）。使用10μL/孔的蛋白酶底物溶液用于96孔板。
注意：2X測定緩沖液（組分C）設計用于檢測胰凝*蛋白酶，胰*白酶，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白細胞彈性蛋白酶的活性。 對于其他蛋白酶，請參閱附錄I了解適當的分析緩沖液配方。
1.3蛋白酶稀釋：將蛋白酶在1X測定緩沖液中稀釋至濃度為500-1000nM。每個孔需要10μL蛋白酶稀釋液。為所有測試樣品準備適當的量，并為陽性對照和載體對照孔準備額外的量。
2.根據說明書中的表1和表2，將步驟1中制備的試劑加入96孔微量培養板中。
3.運行酶促反應：
3.1將10μL蛋白酶底物溶液（來自步驟1.2）加入陽性對照（PC），載體對照（VC）和測試樣品（TS）的孔中。 充分混合試劑。
3.2用Ex / Em = 490 / 525nm的熒光板讀數器監測熒光強度。
對于動力學讀數：立即開始連續測量熒光強度，每5分鐘記錄數據30分鐘。
終點讀數：將反應在所需溫度下孵育30至60分鐘，避光。 然后測量熒光強度。
