Amplite 熒光法通用型蛋白酶活性檢測試劑盒 蛋白酶測定法廣泛用于蛋白酶抑制劑的研究和蛋白酶活性的檢測。監(jiān)測各種蛋白酶活性已成為許多生物實驗室的常規(guī)任務。 一些蛋白酶已被確定為良好的藥物開發(fā)目標。
我們的Amplite 通用熒光蛋白酶活性檢測試劑盒是進行常規(guī)檢測分離蛋白酶或鑒定蛋白質(zhì)樣品中污染蛋白酶的理想選擇。該試劑盒使用熒光酪蛋白偶聯(lián)物，其被證明是廣譜蛋白酶（例如*，*，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和彈性蛋白酶）的通用底物。在完整的底物中，酪蛋白用綠色熒光染料嚴重標記，導致顯著的熒光猝滅。蛋白酶催化的水解減輕了其猝滅效應，產(chǎn)生明亮的熒光染料標記的短肽。熒光強度的增加與蛋白酶活性成正比。 該測定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行，并且易于適應自動化。使用FITC濾光片組，可以使用熒光酶標儀在Ex / Em = 490/525 nm下輕松讀取其信號。百螢生物為您提供 優(yōu)質(zhì)的Amplite 熒光法通用型蛋白酶活性檢測試劑盒。
一個96孔板的測定方案
以下說明書僅提供指南，實際應根據(jù)您的具體需求進行修改。
概述（方案A）
檢測樣品中的蛋白酶活性
準備蛋白酶底物溶液 (50 µL)
添加底物對照、陽性對照或測試樣品 (50 µL)
跳過孵育以進行動力學讀數(shù)或孵育 30 至 60 分鐘以進行終點讀數(shù)
在 Ex/Em = 490/525 nm 處檢測熒光強度
概述（方案B）
使用純化酶篩選蛋白酶抑制劑
準備蛋白酶底物溶液 (10 µL)
添加底物對照、陽性對照、載體對照或測試樣品 (90 µL)
跳過孵育以進行動力學讀數(shù)或孵育 30 至 60 分鐘以進行終點讀數(shù)
在 Ex/Em = 490/525 nm 處檢測熒光強度
工作溶液配制
在 2X 檢測緩沖液（組分 C）中以 1:100 的比例稀釋蛋白酶底物（組分 A）。在 96 孔板中，每次測定使用 50 μL 的蛋白酶底物溶液。
注意：2X 檢測緩沖液（組分 C）設計用于檢測糜*白酶、胰*白酶、嗜熱菌蛋白酶、蛋白酶 K、蛋白酶 XIV 和人類白細胞彈性蛋白酶的活性。對于其他蛋白酶，請參閱下表 1 以了解適當?shù)臏y定緩沖液配方。
在去離子水中以 1:50 的比例稀釋胰*白酶（5 U/µL，組分 B），以獲得 0.1 U/µL 的濃度。
將 5 mL 去離子水加入 5 mL 的 2X 檢測緩沖液（組分 C）中。
在 1X 檢測緩沖液中以 1:20 稀釋蛋白酶底物（組分 A）。對 96 孔板使用 10 μL/孔的蛋白酶底物溶液。
注意：2X 測定緩沖液（組分 C）設計用于檢測糜*白酶、胰*白酶、嗜熱菌蛋白酶、蛋白酶 K、蛋白酶 XIV 和人類白細胞彈性蛋白酶的活性。對于其他蛋白酶，請參閱下表 1 以了解適當?shù)臏y定緩沖液配方。
將 1X 檢測緩沖液中的蛋白酶稀釋至 500-1000 nM 的濃度（對于胰*白酶 50-100 U/mL）。每孔需要 10 μL 的蛋白酶稀釋液。為所有測試樣品準備適當?shù)牧浚瑸殛栃詫φ蘸洼d體對照孔準備額外的量。
