Amplite 比色法黃P呤檢測(cè)試劑盒 是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)的試劑盒，是在大多數(shù)人體組織和液體中發(fā)現(xiàn)的嘌呤堿。 許多來(lái)源于，包括，氨*，IBMX，旁，己酮*，*和*，它們可以刺激心率，收縮力，高濃度的心律失常。 因此，檢測(cè)生物樣品中的變化對(duì)于疾病診斷和治療監(jiān)測(cè)是重要的。 Amplite 比色測(cè)定試劑盒為測(cè)量提供了一種快速且超靈敏的方法。 它可以用方便的96孔或384孔微量滴定板格式進(jìn)行。 在氧化酶存在下氧化成尿酸釋放過(guò)氧化氫，用吸光度酶標(biāo)儀在576nm處用Amplite Red進(jìn)行特異性測(cè)定。 使用Amplite 比色測(cè)定試劑盒，在100μL反應(yīng)體積中檢測(cè)到低至1.2μM的。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的Amplite 比色法黃P呤檢測(cè)試劑盒。
樣品實(shí)驗(yàn)方案
簡(jiǎn)要概述
1.準(zhǔn)備黃P呤標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品（50 µL）
2.添加黃P呤工作溶液（50 µL）
3.在室溫下孵育30-60分鐘
4.OD比為570/610 nm時(shí)讀取吸光度增加
溶液配制
1.儲(chǔ)存溶液配制
所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 Amplite 紅色底物儲(chǔ)備液（250X）：
在Amplite 紅色底物（組分A）的小瓶中加入40 µL DMSO（組分F）。注意：Amplite 紅色底物在硫醇（如二硫蘇糖醇（DTT）和2-巰JI乙醇）的存在下不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT或2-巰JI乙醇的終濃度應(yīng)不高于10 µM。由于Amplite Red的pH不穩(wěn)定> 8.5，因此應(yīng)在pH 7 – 8（建議pH 7.4）下進(jìn)行測(cè)定。
1.2 HRP儲(chǔ)備溶液（500X）：
將100 µL測(cè)定緩沖液（組分B）加到辣根過(guò)氧化物酶（組分C）小瓶中。
1.3 黃P呤氧化酶（XO）儲(chǔ)備溶液（100X）：
向小瓶黃P呤氧化酶標(biāo)準(zhǔn)品（組分E）中添加100 µL測(cè)定緩沖液（組分B），制成黃P呤氧化酶（XO）儲(chǔ)備液（100X）。
1.4 黃P呤標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 µM）：
將5 µL黃P呤標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）添加到995 µL測(cè)定緩沖液（組分B）中，得到100 µM黃P呤標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
黃P呤標(biāo)準(zhǔn)品
用100 µM黃P呤標(biāo)準(zhǔn)溶液（X7）進(jìn)行1：3系列稀釋?zhuān)垣@得黃P呤標(biāo)準(zhǔn)液（X6-X1）。
3.工作溶液配制
將20μL的Amplite Red底物儲(chǔ)備液（250X），10μL的HRP儲(chǔ)備液（500X）和50μL的黃呤氧化酶儲(chǔ)備液（100X）加入5 mL的測(cè)定緩沖液中，使總體積為5.08 mL，避光。
