Amplite 比色法甘油-3-磷酸檢測(cè)試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)甘油的試劑盒，甘油3-磷酸（G3P）是糖酵解代謝途徑中的重要中間體。動(dòng)物，和植物使用G3P產(chǎn)生ATP。 它用于再生腦和骨骼肌細(xì)胞中的NAD +。 G3P與肥胖等脂質(zhì)失衡疾病有關(guān)。 Amplite G3P分析試劑盒提供了量化G3P靈敏的方法之一。 該試劑盒使用Amplite Red底物來(lái)量化G3P的濃度，其與酶偶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)中形成的過(guò)氧化氫的濃度成比例。 該試劑盒是與HTS應(yīng)用兼容的優(yōu)化“混合和讀取”格式。 如圖1所示，它可在100μL檢測(cè)體積內(nèi)檢測(cè)到12.5μMG3P。檢測(cè)方法可以使用方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，并且易于適應(yīng)自動(dòng)化而無(wú)需分離步驟。 使用吸光度酶標(biāo)儀可以在?576 +/- 5 nm處輕松讀取信號(hào)。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 比色法甘油-3-磷酸檢測(cè)試劑盒。
樣品實(shí)驗(yàn)方案
簡(jiǎn)要概述
1.制備3-磷酸甘油工作溶液（50 µL）
2.加入3-磷酸甘油標(biāo)準(zhǔn)液或測(cè)試樣品（50 µL）
3.在室溫下孵育30分鐘至1小時(shí)
4.監(jiān)測(cè)575 nm OD處的吸光度增加
溶液配制
1.儲(chǔ)存溶液配制
所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 Amplite Red底物儲(chǔ)備液（200X）：
將50 µL DMSO（組分E）添加到Amplite Red底物（組分A）的小瓶中，制成200X儲(chǔ)備液。 避免暴露在光線下。
1.2 G3P標(biāo)準(zhǔn)溶液（10 mM）：
將250 µL ddH2O加到G3P標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）的小瓶中，制成10 mM G3P標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
G3P標(biāo)準(zhǔn)
將100 µL 10 mM G3P標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液添加到900 µL 1X PBS緩沖液中，以生成1000 µM G3P標(biāo)準(zhǔn)溶液。 將200 µL的1000 µM G3P標(biāo)準(zhǔn)溶液加入800 µL的1X PBS緩沖液中，以生成200 µM的G3P標(biāo)準(zhǔn)溶液（CS7），然后進(jìn)行1：2的系列稀釋，以得到其余的G3P標(biāo)準(zhǔn)液（CS6-CS1）。 注意：稀釋的G3P標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。
3.工作溶液配制
3.1 將5 mL測(cè)定緩沖液（組分C）添加到瓶酶混合液（組分B）中，并充分混合。
3.2 將25 µL Amplite Red底物儲(chǔ)備液（200X）加入同一瓶酶混合液（組分B）中，制成G3P工作溶液（終瓶應(yīng)包含組分A，B和C）。 注意：應(yīng)立即使用G3P工作溶液，并遠(yuǎn)離光線。
