Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的轉(zhuǎn)染試劑，該試劑是一種功能強(qiáng)大且用途廣泛的轉(zhuǎn)染試劑，可將核酸引入真核細(xì)胞，引入動(dòng)物細(xì)胞。它可以有效地將各種有效載荷轉(zhuǎn)染到各種貼壁和懸浮細(xì)胞系中。它可用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染以及基于siRNA和shRNA的基因敲低實(shí)驗(yàn)和基因表達(dá)研究。它對(duì)所有轉(zhuǎn)染細(xì)胞均提供的轉(zhuǎn)染效率。低毒性也使轉(zhuǎn)染細(xì)胞具有更高的生存能力。與大多數(shù)其他轉(zhuǎn)染試劑相比，更易于使用，并且不需要特殊的介質(zhì)。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑。
樣品實(shí)驗(yàn)方案
簡(jiǎn)要概述
1.準(zhǔn)備細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染
2.準(zhǔn)備DNA混合物
3.將DNA混合物添加到細(xì)胞培養(yǎng)物中
4.過(guò)夜培養(yǎng)
5.用適當(dāng)?shù)姆椒ǚ治鲛D(zhuǎn)染效率
溶液制備
1.工作溶液配制
1.1將2.5ug DNA與200uL無(wú)血清培養(yǎng)基混合。
1.2在步驟1中添加7.5 u該試劑。
1.3充分混合并在室溫下孵育20分鐘。 注意：該試劑和DNA的比例需要針對(duì)不同的細(xì)胞系進(jìn)行優(yōu)化，通常：該試劑（uL）與DNA（ug）的比例= 3-5 uL至1ug
6孔板與10cm板樣品方案
| 組成 | 6孔板（每孔） | 10厘米板 |
| 新鮮培養(yǎng)基 | 2ml | 6ml |
| 質(zhì)粒 | ~2.5ug | 7.5-10ug |
| 無(wú)血清培養(yǎng)基 | 200ul | 600ul |
樣品示例及操作
1.細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備
1.1轉(zhuǎn)染時(shí)將細(xì)胞培養(yǎng)至約90％融合。
1.2轉(zhuǎn)染前用新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基替換。 例如，對(duì)于6孔板，每孔用2 mL培養(yǎng)基替換，對(duì)于10 cm板，用6 mL培養(yǎng)基替換。
2.轉(zhuǎn)染方案
將Transfectamine 5000 -DNA混合物添加至培養(yǎng)板并培養(yǎng)過(guò)夜。 注意：重組蛋白早可在轉(zhuǎn)染后16小時(shí)開(kāi)始檢測(cè)。轉(zhuǎn)染后72?96小時(shí)可觀察到大表達(dá)水平。
