本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!
產品名稱 | 規格 | 檢測方法 | 貨號 |
輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒微量法 | 100管/48樣 | 微量法 | BK-01S6349 |
商品介紹：
測定意義: 輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，NADP+和NADPH含量測定可以計算NADP（NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應密切相關。NADPH/NADP+比值不僅是細胞氧化還原態的主要標志之一，而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調控作用。 測定原理 分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+和NADPH。NADPH通過PMS的遞氫作用，使氧化型噻唑藍（MTT）還原為甲瓚，570nm下檢測吸光值，從而測定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+為NADPH，從而檢測NADP+含量。 所需的儀器和用品 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實驗結果判斷我有妙招：
1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩定試劑的分類及要求：
① 易揮發、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發生反應的物質要密封，并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存，其相應的溶液較固體更易反應，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。
e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據待檢測樣品(包括標準品) 數量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現配現用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現配現用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現稀釋現使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
改良EC肉湯(mEC+n)顆粒 Modified EC Broth 225ml/袋*10
100µL 即用型GFP標簽蛋白裂解液 GFP-Tagged Protein Lysate -20℃保存
2 ug pTCK303 pTCK303 低溫運輸，-20℃保存
4次 大提柱式動物DNAout Maxi Column Animal DNAOUT 常溫
2 ug pDR195 pDR195 低溫運輸，-20℃保存
50%卵黃乳液 50% egg Yolk emulsion 5ml*10
100mL 瓊脂糖凝膠 4B Sepharose 4B 4-8℃保存
50T 蟹特定基因序列PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
200 mL 大鼠 NK 細胞分離液1.068 Cell Separation Solution -20℃保存
100mL Glycylglycine Buffer,0.5M,pH8.0 Glycylglycine Buffer,0.5M,pH8.0 常溫保存
七葉苷生化管 20支
輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒微量法CD144/VECD/VE Cadherin 上皮型鈣粘附分子抗體 規格: 0.1ml
Mafa v-maf 肌腱膜纖維肉瘤基因同源物A抗體 規格: 0.1ml
DCTN6 動力蛋白激活蛋白6抗體 規格: 0.2ml
IFNA16/Interferon alpha 16 干擾素α16抗體 規格: 0.2ml
PAPP A2 娠相關漿蛋白A2抗體 規格: 0.2ml
Phospho-TrkA (Ser791) 磷酸化酪激A抗體 規格: 0.1ml
Phospho-Mcl1 (Ser159/Thr163) 磷酸化髓樣細胞白-1抗體 規格: 0.1ml
Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗牛IgM 規格: 0.1ml
BRCA2 易基因2抗體 規格: 0.1ml
CXX1/Cerebral protein 5 腦蛋白5抗體 規格: 0.2ml
CLK3 細胞分裂周期樣激3抗體 規格: 0.2ml
CD24 CD24抗體 規格: 0.1ml
