特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
檢測方法：紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號：BK-01S6368
產(chǎn)品分類：輔酶Ⅱ系列
商品介紹：
測定意義: SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷鍵，催化葡萄糖基轉(zhuǎn)移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等，合成相應(yīng)的葡萄糖基低聚糖。此外，SP還能催化合成熊果苷，具有的美白效果，在化妝品工業(yè)中具有重要應(yīng)用。 測定原理： SP能夠以磷酸為受體，催化蔗糖產(chǎn)生1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸變位酶催化下變位為6-磷酸葡萄糖，在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下還原NADP+生成NADPH，導(dǎo)致340nm光吸收值增加。測定340nm吸光度增加速率，即可計(jì)算SP活性。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器： 天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1mL石英比色皿和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
1瓶 PA317細(xì)胞株 PA317 低溫運(yùn)輸和保存
兔血漿 Rabbit plasma 0.5ml*10
50g 酪蛋白 Casein From Bovine Milk 室溫干燥保存
500mL Wash Buffer Wash Buffer 常溫保存
100U 二酯Ⅰ Phosphodiesterase I -20℃保存
2 ug pUSE （Amp） pUSE （Amp） 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
50次 柱式海洋動物DNAout Column Marine Animal DNAOUT 常溫
2 ug p3×FLAG-CMV-8 p3×FLAG-CMV-8 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基 LBS Agar 250g
25g 1：250 Trypsin 1:250 Porcine Pancreas 4℃保存
50T 豬腦心肌炎病毒PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒紫外分光光度法Integrin beta 6 整合素β6抗體（Integrin β6） 0.2mlAdenylate Kinase 1/AK1 苷酸激-1抗體 規(guī)格: 0.2ml
LAMP-3/DC-LAMP/CD208 溶體相關(guān)膜蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HER3(Tyr1328) 磷酸化HER3受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Exendin 4 GLP1類似蛋白Exendin4抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-LSP1 (Ser204) 磷酸化白細(xì)胞F肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Goat Anti-Bovine IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1mlCR1/CD35 Ⅰ型補(bǔ)體受體抗體（C3b/C4b受體抗體） 規(guī)格: 0.1ml
KLHL36/C16orf44 Kelch樣蛋白36抗體 規(guī)格: 0.2mlCASC5 瘤易性候選基因5抗體 規(guī)格: 0.2ml
GABRA1 G1氨基丁酸A型受體α1抗體 規(guī)格: 0.1mlTIMP-2 金屬蛋白組織抑制因子-2抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-APE(Ser1417) 磷酸化肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體 規(guī)格: 0.1mlDC-SIGN/CD209 細(xì)胞間粘附分子非整合素蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgM/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 規(guī)格: 0.1mlPLGLB2 纖溶相關(guān)蛋白B2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Cdc7 細(xì)胞分裂周期蛋白7抗體 規(guī)格: 0.1mlAKT3 蛋白激B3 規(guī)格: 0.1ml
HSPBAP1 熱休克蛋白27相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlGRM2/GLUR2 促代謝型谷受體2抗體 規(guī)格: 0.1ml
TTC23 宮頸原基因8抗體 規(guī)格: 0.2mlCytokeratin 13/CK-HMW 高分子量細(xì)胞角蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
RIT1 RIT1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlTPSB2 肥大細(xì)胞類胰蛋白β2 規(guī)格: 0.1ml
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通常可以使測定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
