實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：琥珀酸脫氫酶（SDH)測(cè)試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
檢測(cè)方法：可見分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6576
產(chǎn)品分類：三羧酸循環(huán)系列
商品介紹：
測(cè)定意義: SDH（EC 1.3.5.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。SDH是線粒體的一種標(biāo)志酶，位于線粒體內(nèi)膜上的一種膜結(jié)合酶，是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外，為多種原核細(xì)胞產(chǎn)能的呼吸鏈提供電子。 測(cè)定原理 SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下的氫通過(guò)吩嗪二甲酯硫酸（PMS）傳遞還原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm處具有特征吸收峰，通過(guò)600nm吸光度的變化，測(cè)定2．6-DPIP的還原速度，代表SDH酶活性。 需自備的儀器和用品 可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是（1）試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒(méi)有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
乳酸桿菌糖發(fā)酵培養(yǎng)基 Lactobacillus Carbohydrate Fermentation Medium 250g
1瓶 22RV1細(xì)胞株 22RV1 低溫運(yùn)輸和保存
50T 豬細(xì)小病毒PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
25 T 超微量ATP測(cè)試盒(測(cè)Ca2+Mg2+ATPase) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
100mL Lithium Chloride Solution（氯化鋰溶液）,200mM Lithium Chloride Solution,200mM 常溫保存
50次 LAMP擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照 LAMP Positive Control -20℃保存
2 ug pLVX-CMV pLVX-CMV 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
胰蛋白胨酵母膏葡萄糖肉湯 Tryptone-Yeast Extract-Glucose Broth 250g
2 ug pMMB206 pMMB206 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
50T 病毒H9亞型PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
10 mg Lucigenin（光澤精） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
琥珀酸脫氫酶（SDH)測(cè)試盒可見分光光度法phospho-IKK beta(Ser476) 磷酸化KB抑制蛋白激β抗體 規(guī)格: 0.1ml
CARD10 BCL10結(jié)合蛋白和激活核轉(zhuǎn)錄因子抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-Bik(Thr33) 磷酸化促凋亡Bik蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
ACTRIC/Activin A Receptor Type IC 激活素受體1C抗體 規(guī)格: 0.2ml
C20ORF141 20號(hào)染色體開放閱讀框141抗體 規(guī)格: 0.2ml
Protor-1 抑制基因Protor1抗體 規(guī)格: 0.2ml
SAMD14 SAMD14抗體 規(guī)格: 0.2ml
SSX8 滑膜肉瘤X斷點(diǎn)蛋白8抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-CHEK1 (Ser280) 磷酸化細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激1抗體 規(guī)格: 0.1ml
MKK7/ERK7 絲裂原活化蛋白激MKK7抗體 規(guī)格: 0.1ml
AICDA 活化誘導(dǎo)胞嘧啶核苷脫氨抗體 規(guī)格: 0.2ml
IL-26/AK155 白介素26抗體 規(guī)格: 0.2ml
