本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!
產品名稱 | 規格 | 檢測方法 | 貨號 |
磷脂酶D（PLD）測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6655 |
商品介紹：
測定意義: 磷脂酶D（EC3.1.4.4）即磷脂酰水解酶，是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應的一類酶的總稱，廣泛存在于高等動植物和細菌等多種生物體中，具有參與細胞脂質代謝、信號傳導、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能。 測定原理 磷脂酶D催化水解磷脂酰末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和，在氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫，過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將4-氨基和重蒸酚氧化成粉紅色物質，在500nm處有特征吸收峰。 自備實驗用品及儀器 天平、研缽、超速冷凍離心機、可見分光光度計、微量石英比色皿、恒溫水浴鍋，無水乙醇。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實驗結果判斷我有妙招：
1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩定試劑的分類及要求：
① 易揮發、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發生反應的物質要密封，并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存，其相應的溶液較固體更易反應，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。
e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據待檢測樣品(包括標準品) 數量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現配現用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現配現用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現稀釋現使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
1 mg Rhod-2，三鈉鹽 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
250mL Carbonate Buffer（鹽緩沖液）,0.5M,pH9.5 Carbonate Buffer,0.5M,pH9.5 常溫保存
25mL 親和硅烷 Binding Silane 常溫
2 ug pGTf2 pGTf2 低溫運輸，-20℃保存
鹽瓊脂 Mannitol Salt Agar 250g
1瓶 HP615細胞株 HP615 低溫運輸和保存
瓷珠菌種保存管（50支） Strain Store Medium 50支/盒
10g 干粉 Lysozyme Powder 4℃或-20℃保存
250mL Sodium Bicarbonate Buffer（鈉緩沖液），1M，pH9.0 Sodium Bicarbonate Buffer，1M，pH9.0 常溫保存
1 管 Rosetta-gamiB(DE3)plysS大腸桿菌 Rosetta-gami B(DE3)plysS E.coli Strain -80℃保存
2 ug pSos MAFB pSos MAFB 低溫運輸，-20℃保存
磷脂酶D（PLD）測試盒微量法CD46/MCP 膜輔蛋白抗體 規格: 0.2ml
Mouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的小鼠抗人IgG 規格: 0.1ml
ALDH1 乙醛脫1型抗體 規格: 0.2ml
IGSF2/CD101 CD101抗體 規格: 0.2ml
CENPF 有絲分裂著絲粒蛋白F抗體 規格: 0.2ml
WNT5A 信號通路Wnt5a抗體 規格: 0.1ml
Phospho-Mre11 (Ser676) 磷酸化DNA損傷關鍵蛋白Mre11抗體 規格: 0.1ml
Natriuretic Peptide Receptor A 利鈉肽受體A抗體 規格: 0.2ml
Tetraspan 5 四分子交聯體5抗體 規格: 0.1ml
gamma crystallin S γ晶狀體蛋白S抗體（γS-crystallin） 規格: 0.2ml
FAM120B 組織激活過氧化活化增生受體γ蛋白抗體 規格: 0.2ml
WSB2/WD SOCS box protein 2 信號傳導抑制蛋白WD重復蛋白2抗體 規格: 0.2ml
