本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
血清低密度脂蛋白（LDLC）測(cè)試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6667 |
商品介紹：
測(cè)定意義: 低密度脂蛋白為血清蛋白之一，主要由肝臟合成，與冠心病的發(fā)生和動(dòng)脈粥樣硬化損傷呈正相關(guān)，是脂類疾病分類和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的一個(gè)重要指標(biāo)。 測(cè)定原理 用沉淀劑分離血清中的低密度脂蛋白，利用酯酶催化酯水解生成游離和游離脂肪酸，從而把酯轉(zhuǎn)化為FC；進(jìn)一步利用氧化酶催化FC氧化，生成△4-膽甾烯酮和H2O2；再利用過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基和酚，生成紅色醌類化合物；在500nm有特征吸收峰。 需自備的儀器和用品 離心機(jī)，恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招：
1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照，與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長(zhǎng)期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（P1511）測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
鹽緩沖稀釋液（ph7.2） 9ml*20支
1瓶 Ca761細(xì)胞株 Ca761 低溫運(yùn)輸和保存
O157顯色培養(yǎng)基 O157 chromogenic medium 1000(ML)
500U Bst DNA 聚合，全長(zhǎng) Bst DNA Polymerase, Full Length -20℃保存
500mL Phosphate Buffer，0.2M, pH7.4 Phosphate Buffer，0.2M, pH7.4 常溫保存
0.1mL×10 Rosetta (DE3) pLysS 感受態(tài)細(xì)胞 Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell -80℃保存
2 ug pOJ260 pOJ260 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
R3增殖培養(yǎng)基 250g
1瓶 U87MG細(xì)胞株 U87MG 低溫運(yùn)輸和保存
MUCAP試劑 MUCAP reagent 2ml*4支/盒
1000U 葡萄糖 -6- 脫氫 G6P-DH -20℃保存
血清低密度脂蛋白（LDLC）測(cè)試盒微量法NEEP21 NEEP21蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlPatched/PTCH Patched/PTCH抗體 規(guī)格: 0.1ml
NEK3 絲/蘇蛋白激Nek3抗體 規(guī)格: 0.2mlSCNN1D/δENaC 上皮鈉離子通道蛋白D抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-Crkl (Tyr207) 磷酸化接蛋白CrkL抗體 規(guī)格: 0.1ml
SHIP1 SH2結(jié)構(gòu)含磷酸肌醇SHIP1抗體 規(guī)格: 0.2ml
MURF2 肌肉特異性環(huán)指蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
CNKSR2 Ras激抑制因子連接增強(qiáng)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
CCDC106 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白106抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-human IgM/APC APC標(biāo)記的羊抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml
MID1/Midline-1/RNF59 環(huán)指蛋白59抗體 規(guī)格: 0.2ml
SHC SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
MMP-15 基質(zhì)金屬蛋白-15抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-LATS1+LATS2 (Thr1079 +Thr1041) 磷酸化瘤抑制基因LATS1/LATS2抗體 規(guī)格: 0.1ml
