特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：濾紙酶測試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
檢測方法：可見分光光度法
產(chǎn)品貨號：BK-01S6762
產(chǎn)品分類：糖代謝系列
商品介紹：
測定意義: 纖維素酶是由微生物產(chǎn)生的多組分的酶系，能水解纖維素β-1,4葡萄糖苷鍵生成葡萄糖，濾紙酶是其中的一個組分，研究濾紙酶活力對纖維素酶的研究具有非常重要的意義。 測定原理 濾紙酶水解濾紙產(chǎn)生的還原糖能與3,5-二硝基水楊酸生成紅棕色氨基化合物，在540nm處有最大光吸收，在一定范圍內(nèi)反應(yīng)液顏色深淺與還原糖的量成正比，可測定計算得濾紙酶的活力。 自備實(shí)驗用品及儀器 天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實(shí)驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗流程，避免實(shí)驗
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
實(shí)驗方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
2 ug pOTB7 FKBPL pOTB7 FKBPL 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
3%NaCl雙水解 20支
2 ug pLVX-ZsGreen1-N1 pLVX-ZsGreen1-N1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
柯氏尿素瓊脂 250g
3000U 谷脫氫 GLDH -20℃保存
50T 壞死梭桿菌PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
300µL 山羊抗兔IgG（H+L），辣根過氧化物標(biāo)記 Goat Anti-Rabbit IgG(H+L),HRP Conjugate -20℃保存
250mL Alsever’s Solution Alsever’s Solution 常溫保存
10mL DNA洗脫液2.0
2 ug pFAST III pFAST III 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基 Rose Bengal Agar Medium 250g
濾紙酶測試盒可見分光光度法GLT8D1 糖基轉(zhuǎn)移8結(jié)構(gòu)域1抗體 規(guī)格: 0.2ml
AQP2 水通道蛋白-2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Nitrotyrosine 硝基酪抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-PAK1(Thr423)/PAK2 (Thr402) 磷酸化p21激活激1/2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/FITC FITC標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.3ml
CK18 細(xì)胞角蛋白18抗體 規(guī)格: 0.1ml
COL6A5/Collagen VI alpha 5 6型膠原蛋白α5抗體 規(guī)格: 0.2ml
BEND3 BEND3蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
MCP-3/CCL7 單核細(xì)胞趨化蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml
ELAVL1/HuR ELAVL1抗體 規(guī)格: 0.2ml
SHPRH 組蛋白連接作用蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
注意事項：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時間不夠，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
