本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
細胞色素b5含量測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6791 |
商品介紹：
測定意義: 細胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶，在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用，尤其是藥物和毒物的代謝。細胞色素P450和細胞色素b5是P450酶系的兩個血紅素蛋白，其比值的變化與P450代謝活性密切相關(guān)。 測定原理： 氧化型細胞色素b5經(jīng)連二亞硫酸鈉還原后，在424nm處有最大吸收峰，通過測定424nm和490nm處吸光值的差異，即可計算出細胞色素b5的含量。 自備儀器和用品： 普通離心機，超速離心機、可調(diào)式移液槍、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實驗結(jié)果判斷我有妙招：
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準品準備：需自備SOD標(biāo)準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準品，但可以使用SOD標(biāo)準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
2 ug pSUOER-retro-neo/GFP pSUOER-retro-neo/GFP 低溫運輸，-20℃保存
100mL 重蒸 Redistilled Phenol 常溫避光保存
2 ug pCMV-Tag 3A pCMV-Tag 3A 低溫運輸，-20℃保存
木糖-明膠 Xylose - gelatin medium 250g
500g 鐵化鉀 Potassium Ferrocyanide 室溫保存
50T 屬PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
2mg Superoxide dismutase（抗氧化） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
250mL Elution Buffer Elution Buffer 常溫保存
100g 聚乙二醇 PEG 室溫
2 ug pIRES2-GKP pIRES2-GKP 低溫運輸，-20℃保存
金胺O染色液 5ml*6
細胞色素b5含量測試盒微量法FAM59A FAM59A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
NKR/Neurokin B receptor 神經(jīng)激肽B受體抗體 規(guī)格: 0.2ml
HDAC3/HD3 組蛋白去乙酰化3抗體 規(guī)格: 0.1ml
NLRP7 富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/PE PE標(biāo)記的兔抗人IgG F(ab')2 規(guī)格: 0.1ml
TMPRSS5 跨膜絲蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml
BAGE2 瘤/睪抗原2.2抗體 規(guī)格: 0.2ml
RRM1 核糖核苷酸還原1抗體 規(guī)格: 0.1ml
LOX-1/OLR1 凝集素樣氧化型脂蛋白受體抗體 規(guī)格: 0.2ml
TFCP2C 轉(zhuǎn)錄因子CP2抗體 規(guī)格: 0.2ml
ACBD4 酰基輔A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-IKK alpha/beta (Ser176/Ser180) 磷酸化KB抑制蛋白激α/β抗體 規(guī)格: 0.1ml
