【產品簡介】
產品名稱:激活素A(ACVA)測定試劑盒免費代測
英文名稱:ACVA (Activin A) ELISA Kit
規格:48T/96T
貨號:XG-E63212
需自備試劑和器材:
1. 標準規格酶標儀。
2. 自動洗板機。
3. 37℃恒溫箱。
4. 系列可調節移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時**用多通道移液器。
5. 干凈的試管和 Eppendof 管。
6. 使用中性 PBS 或 TBS 作為洗滌液。0.01M TBS 配法為:1000ml H2O 中加 Tris 1.2g, NaCl 8.5g; 純乙酸 450μ l 或濃鹽酸 700μ l 左右調節 pH 值(7.2-7.6)。0.01 M PBS(pH7.2-7.6) 配法:1000ml 蒸餾水中加氯化鈉 8.5g, Na2HPO4 1.4g, NaH2PO4 0.2g。如果用的是含水磷酸鹽,應加上分子式中水的含量。
9. 蒸餾水
10. 吸水紙
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據抗體說明書方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)備注:有些抗原勿需修復,直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的*化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
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人骨成型蛋白4 (BMP-4)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human BMP-4 (Bone Morphogenetic Protein 4) ELISA Kit
人骨成型蛋白7 (BMP-7)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human BMP-7 (Bone Morphogenetic Protein 7) ELISA Kit
人上皮型鈣黏蛋白 (E-Cad)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human E-Cad (E-Cadherin) ELISA Kit
人碳酸酐酶IX (CA9)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human CA9 (Carbonic Anhydrase IX) ELISA Kit
人胱天蛋白酶1(CASP1)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human CASP1 (Caspase 1) ELISA Kit
激活素A(ACVA)測定試劑盒免費代測巴卡丁 III(標準品)Baccatin III :27548-93-2 質量規格:HPLC>98%,標準品
*(標準品)Cilostazol :73963-72-1 質量規格:HPLC>98%,標準品
多烯*無水/*(標準品)Docetaxel anhydrous :114977-28-5 質量規格:HPLC>99%,標準品
*鈉Fosfomycin sodium :26016-99-9 質量規格:>96%
*(標準品)Levetiracetam :102767-28-2 質量規格:HPLC>98%,標準品
*Olanzapine :132539-06-1 質量規格:>99%,USP,BR,可用于細胞培養
白藜蘆醇(標準品)Resveratrol :501-36-0 質量規格:HPLC≥99%,標準品
*(標準品)Tacrolimus /FK506 monohydrate :109581-93-3 質量規格:≥98%,標準品
重長春瑞賓(標準品)Vinorelbine Tartrate :125317-39-7 質量規格:HPLC≥98%,標準品
乙酰*Acetylspiramycin :24916-51-6 質量規格:>1200u/mg,CP2005
*(標準品)Cyclophosphamide :6055-19-2 質量規格:HPLC>99%,標準品
格列吡 Glipizide :29094-61-9 質量規格:>98%,BR
鹽酸*Ambroxol HCl :23828-92-4 質量規格:>98%,BR
D-半乳糖醛酸(標準品)D-Galacturonic acid :91510-62-2 質量規格:UV法含量測定;一水物
*(標準品)Duloxetine hcl :136434-34-9 質量規格:HPLC>98%,標準品
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內進行。