RNAfixer 無液氮 RNA 樣品儲存液

保存條件：

室溫(18-25℃)保存1 年以上，如果使用時發(fā)現(xiàn)有沉淀或者析出，可以37℃水浴加熱重新溶解后使用，重新溶解后不會影響產(chǎn)品質(zhì)量。
產(chǎn)品介紹：
RNAfixer 是一種液態(tài)的無毒的組織保存液體，可以迅速滲入新鮮組織細(xì)胞的胞漿中，在非凍狀態(tài)下原位穩(wěn)定和保護細(xì)胞內(nèi)的RNA。取下組織薄片后立刻浸入RNAfixer 保存并不影響將來提取RNA 的質(zhì)量和數(shù)量。RNAfixer 消除了RNA 樣品需要立刻處理或者必須液氮保存的不方便。浸入RNAfixer 后，新鮮組織細(xì)胞中RNA 可以完好的在37℃下保存一天，在25℃下保存一周，4℃下保存一個月，在-20℃或-80℃下長期保存。
RNA 病毒樣品(如HCV 和HIV)可在37℃保存一個月。適用于動物組織（心、肝、腎、肌肉、睪丸、腦、脾等）、培養(yǎng)細(xì)胞、RNA 病毒、 果蠅、細(xì)菌、白細(xì)胞、一些植物組織等。
產(chǎn)品特點：
1.操作容易：將組織成適當(dāng)大小，浸沒在RNAfixer 中即可使其RNA 不被降解。
2.無需液氮：使樣品的保存不需液氮,干冰或-80℃冰箱,尤其適用于臨床和野外樣品的快速和大規(guī)模采集。
3.方便運輸：處理過的樣品能在25℃保存一周,使樣品郵寄和運輸變得容易和便宜,有利學(xué)術(shù)合作和交流。
4.多次凍融: 經(jīng)RNAfixer 處理的樣品可反復(fù)凍融多次, 其間可對樣品進行各種處理而不影響最終提取的RNA 的質(zhì)量。
5.可比性強: RNAfixer 能減少大規(guī)模樣品處理中的誤差,增加各次實驗數(shù)間的可比性, 對大規(guī)模基因表達(dá)譜的分析尤其有用。
使用說明：
RNAfixer 只用于新鮮組織，浸泡入 RNAfixer 前禁止冷凍組織。只需要迅速將新鮮組織成長、寬，高任意一邊厚度<0.5 厘米浸泡入 RNAfixer 即可（只要有一邊厚度不超過 0.5 厘米，RNAfixer 可以迅速滲透，其它兩邊的尺寸并不重要）。將新鮮組織浸泡 在 5 倍體積的 RNAfixer 中，按照指示存放在適當(dāng)?shù)臏囟取?/span>
1.動物組織 RNAfixer 并不破壞或者溶解組織結(jié)構(gòu)，因此浸泡在 RNAfixer 中達(dá)到滲透平衡的組織 可以從 RNAfixer 中取出，然后切成更小的塊，然后放回到 RNAfixer 中下次繼續(xù)使用。小器官如小鼠肝、腎、脾不需要剪切,可以完整的存放在 RNAfixer 中。
推薦不同組織樣品的 RNAstore 使用量：

2.植物組織很多植物組織直接浸泡入 RNAfixer 即可，有的植物有天然滲透屏障如臘質(zhì)保護層，需要先破壞掉臘質(zhì)層,便于 RNAfixer 滲透。
3.組織培養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞吹打下來后,離心收集細(xì)胞,棄上清，用冰浴的 PBS 緩沖液洗一次去除殘留培養(yǎng)液。將細(xì)胞懸浮在少量 PBS 緩沖液中。加入五到十倍體積 RNAfixer, 混均。
4.白細(xì)胞對于全血中白細(xì)胞的保存，需將白細(xì)胞從紅細(xì)胞和血清中分離出來，并按組織培養(yǎng)細(xì)胞一樣處理后，白細(xì)胞便能有效地保存在 RNAfixer 中。不要將全血、血漿或血清中的 RNA 保存在 RNAfixer 中，因為它們蛋白含量過高，與 RNAfixer 混合后易形成不溶的沉淀。
5.細(xì)菌
細(xì)菌并不能在 RNAfixer 中生長，但是 RNAfixer 并不破壞細(xì)菌，E. coli 在 4℃保存一個月仍舊可以提出完整的 RNA。
RNAfixer 中樣本的存放：
1.存放在-80℃樣品長期保存用。將 RNA fixer 中樣本放置于 4℃過夜，然后將樣本撈出，盡量去除干凈 RNAfixer 液體，然后放置于-80℃。對于組織培養(yǎng)細(xì)胞，則不需要去除RNAfixer，直接冷凍于-80℃，并不會裂解細(xì)胞。樣品使用時可以在室溫融化，并且還可以再次冷凍而不影響 RNA 的完整性和產(chǎn)量。
2.存放在-20℃將 RNAfixer 中樣本放置于 4℃過夜，然后轉(zhuǎn)移到-20℃。在-20℃樣品并不會被冰凍,但是可能會形成一些結(jié)晶，這并不會影響將來的 RNA 提取。樣品使用時可以在室溫 融化，并且還可以再次冷凍而不影響 RNA 的完整性和產(chǎn)量。
3.存放在 4℃樣本可以在 4℃存放一個月。
4.存放于 25℃存放于 25℃樣本的 RNA 在一周內(nèi)保持完整，保存兩周的樣品 RNA 有輕微降解，勉強能用于northern analysis, 但是質(zhì)量足夠用于nuclease protection assay or RT-PCR 。
5.存放于 37℃存放于 37℃樣本的 RNA 在 24 小時內(nèi)保持完整，3 天的時候有部分降解。RNAfixer 保存樣本的 RNA 提取：將樣本從 RNAfixer 中取出,RNAfixer 可以直接倒入水池，用自來水沖即可，不需特殊處理。
1.組織
用干凈鑷子將樣本從 RNAfixer 中撈出，用吸水紙稍稍吸去殘留的 RNAfixer 后，可以和新鮮組織一樣按照液氮研磨，然后勻漿處理的標(biāo)準(zhǔn)程序進行提取 RNA。
2.細(xì)胞
對于儲存在 RNAfixer 中的細(xì)胞有兩種選擇。一是去除 RNAfixer 后提取 RNA, 另一個是直接從細(xì)胞和 RNAfixer 的混合物提取。
1）去除 RNAfixer 后提取 RNA存放于 RNAfixer 中的細(xì)胞變得不那么脆弱，可以承受較高的離心速度而不被裂解。 我們有在 5000g 離心成功收集細(xì)胞的經(jīng)驗，由于每種細(xì)胞的強度不一樣，可以先用不重要的細(xì)胞做個預(yù)試驗，以保證在使用的速度下離心不會破壞細(xì)胞。另一個選擇是在離心前加等體積的 PBS 稀釋 RNAfixer 和細(xì)胞的混合物，以減少溶液的密度，使細(xì)胞溶液可以沉淀下來。
2）不去除 RNAfixer，直接提取 RNA
也可以直接加 10 倍體積的一步法提取試劑（如 TRIpure，TRI reagent）到細(xì)胞和RNAfixer 的混合物，然后按照正常步驟操作。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達(dá)量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應(yīng)時設(shè)計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長片段、全長產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進行設(shè)計。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優(yōu)化。