PLANTaid 植物 RNA 助提劑

保存條件：常溫運輸，室溫或者 4℃可保存 6 個月。

產品介紹：

植物助提劑 PLANTaid 是針對植物 RNA 提取時，針對富含多糖多酚等不容易清除的特點設計的一種多糖多酚植物 RNA 提取的輔助劑，主要成份為聚乙烯吡咯烷酮等高分子化合物。它們可以和多糖多酚等雜質結合，通過離心去除。它和絕大多數常用的使用高離序鹽（chaotropic salts ）如異硫氰酸胍的 RNA 提取方法兼容。使用方法簡便，只要在正常的 RNA 提取步驟中加一步驟即可。將 PLANTaid 加入裂解液后，研磨，勻漿，PLANTaid 和多糖多酚等雜質結合，離心將 PLANTaid，多糖多酚和任何不溶解的雜質去除,取上清就可以繼續后面的正常RNA 提取步驟。

注意事項：

1.PLANTaid使用過量可能降低RNA產量，由于不同植物中所含多糖，多酚量變異性很大，因此用量應該在實驗中適當調整。

2.如果處理的植物量特別少，按照下面比例計算所需裂解液＋PLANTaid 總體積少于200μl的情況下應該使用不少于200μl的總體積

來提取植物RNA，具體為175μl裂解液＋25μl PLANTaid= 200μl。

使用方法：

1.估計待處理植物體積的方法，我們按照100mg/100μl的比例來估計待處理植物體積。

2.查看使用的RNA提取手冊（方法）的裂解液和植物處理量之間的比例

如果裂解液：植物處理量（體積比）≤9:1,則在所需裂解液中加入九分之一裂解液體積的PLANTaid;

如果裂解液：植物處理量（體積比）>9:1,則在所需裂解液中加入和植物處理量等體積的PLANTaid。

3.舉例說明：

1）如果RNA提取手冊上面裂解液：植物處理量=5:1,植物處理量為100mg(我們認為體積為100μl)，所需裂解液為100μl×5= 500μl，

再加入500μl×1/9＝55.6μl的PLANTaid. 2）如果RNA提取手冊上面裂解液：植物處理量=10:1, 植物處理量為100mg(我們認為體積為100μl)，所需裂解液為100μl×10 = 1000μl，再加入100μl即和植物處理量等體積的PLANTaid。

3）使用上面的混和液按照正常操作步驟研磨，勻漿處理后，將裂解物用速（12000-14000rpm）室溫下離心5 sec。不溶的細胞碎片，PLANTaid和它結合的多糖多酚等雜質可以通過此離心步驟去除。

一、模板DNA：PCR反應需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應具有緩沖作用，調節反應pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應特異性，從而提高反應效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應產物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應時設計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導致小片段產物（＜500bp）的增加和長片段、全長產物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結合目標RNA的已知序列進行設計。由于引物和RNA序列特異性結合，每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當分析多種目標時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優化。