高純質粒小提中量快速提取試劑盒
貨號 | 規格 | 分類 |
XG-P2732 | 50 次 | 核酸純化 |
保存條件:本產品收到后按照上面指示溫度存放各成份,儲存18個月不影響使用效果。
產品介紹:
本試劑盒采用改進SDS-堿裂解法裂解細胞,離心吸附柱內的硅基質膜在高鹽、低pH值狀態下選擇性地結合溶液中的質粒DNA,再通過去蛋白液和漂洗液將雜質和其它細菌成分去除,最后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈質粒DNA從硅基質膜上洗脫。
產品特點:
1.離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩定的弊端。
2.有的去蛋白液配方,可以高效去除殘留的核酸酶,即使是核酸酶含量豐富的菌株也可以輕松去除。有效防止了質粒被核酸酶降解。
3.快速、方便,不需要使用有毒的氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀。獲得的質粒產量高、純度好,可以直接用于酶切、轉化、PCR、體外轉錄、測序等各種分子生物學實驗。
一、模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;
二、引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;
三、dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成 等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;
四、Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;
五、PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;
六、酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。
七、MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。
八、DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;
①Oligo dT
選擇Oligo dT時,要求RNA必須有Poly A,所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT,對RNA樣品的質量要求較高,不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應,建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT,尤其適合模板豐度很低的情況(比如某個gene表達量很低)。選擇隨機引物時,鏈cDNA合成反應中就是以所有的RNA為模板,然后進行PCR反應時設計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關系,一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng,如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng,可能會導致小片段產物(<500bp)的增加和長片段、全長產物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物(GSP)是某個基因序列的一部分,與模板互補的引物。該引物需要結合目標RNA的已知序列進行設計。由于引物和RNA序列特異性結合,每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此,當分析多種目標時,則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同,所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物,建議對退火溫度進行優化。
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