注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
反芻獸曼氏桿菌PCR檢測試劑盒廠家 | Mannheimia ruminalisPCR | BK-P9373 |
原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
兔子γ干擾素(IFN-γ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
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兔子α干擾素(IFN-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
兔子TH糖蛋白(THP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
兔子S100蛋白(S-100)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
兔子S100B蛋白(S-100B)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
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兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
兔子B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
兔子Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
兔子Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
兔子Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
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人多聚ADP核糖聚合酶 96TPARP(Human Poly ADP ribose polymerase) ELISA Kit
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人顆粒酶A 96TGzms-A(Human granzymes A) ELISA Kit
人血管緊張素Ⅱ受體Ⅰa型 96TAgtr I a(Human angiotensin II receptor type I a) ELISA Kit
人干擾素活化基因205 96TIfi205(Human interferon activated gene 205) ELISA Kit
人高香草酸 96T人高香草酸(HVA) ELISA Kit
人雄激素結(jié)合蛋白 96TABP(Human Androgen Binding Protein) ELISA Kit
人細(xì)胞膜表面免疫球蛋白 96TSmIg(Human Surface Membrane Immunoglobulin) ELISA Kit
人抗凝血酶Ⅲ抗體 96THuman Anti-Thrombin III ,AT- III ELISA Kit
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人殺菌性/通透性增加蛋白 96THuman bactericidal/permeabilityincreasingprotein,BPI ELISA Kit
30%丙烯酰胺 100ml30％Acrylamide
蛋白抽提試劑盒-II (液體樣品蛋白抽提和回收) 50次提取
技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。
