注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
假皮疽組織胞漿菌PCR檢測試劑盒價格 | Histoplasma farciminosumPCR | BK-P9270 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum間型脈孢菌
NR8383(大鼠肺泡巨噬細胞)枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis
T-細胞可誘導共刺激分子(ICOS)重組蛋白英文名稱:Recombinant Inducible T-Cell Co Stimulator (ICOS)
煌綠糖膽肉湯/BGLB肉湯/煌綠糖膽增菌/BGLB Broth用于水樣中大腸菌的檢測250克國產/進口
大鼠卵巢顆粒細胞*培養基100mL
人晶體上細胞英文名稱:SRA01/04
人內膜腺細胞檸檬串珠菌 Leuconostoc citreum
PYG體培養基配套試劑 規格: 10支/盒 用途: 試劑A和試劑B各一支添加于100ml (027340)PYG體培養基基礎
露濕漆斑菌洛格酵母 Saccharomyces logos
PC-3M-IE8(人前列腺高轉移細胞株)5×106cells/瓶×2
抗生素Ⅴ號培養基/抗生素5號培養基/Antibiotic Agar NO.5抗生素微生物的效價測定250克國產/進口
假皮疽組織胞漿菌PCR檢測試劑盒價格ME-180(人頸表皮細胞)5×106cells/瓶×2
G1(發綠色熒光的小鼠胚胎干細胞)5×106cells/瓶×2
人鼻咽母系細胞 CNE-2Z
EBV-轉化人淋巴細胞 CAM191
人結腸氟尿嘧啶耐藥株 HCT-8/FU
雙洗瓊脂平板10塊國產/進口
抗生素Ⅱ號培養基(PH6.5-6.6)/抗生素2號培養基(PH6.5-6.6)/Antibiotic Agar NO.2四環素、土霉素等的效價測定250克國產/進口
TSN瓊脂/胰蛋白胨亞硫酸鹽新霉素瓊脂/胰酪胨亞硫酸鹽新霉素瓊脂/胰酶亞硫酸鹽新霉素瓊脂/TSN Agar用于梭菌的檢測250克國產/進口
3.5% NaC1甘露醇發酵管BR20支國產/進口
大鼠氣管上皮細胞*培養基100mL
小鼠膀胱平滑肌細胞*培養基100mL
Fraser湯增菌液FB1配套試劑 規格: 2x5支 用途: 試劑A和試劑B各一支添加于225ml(026080)中配成FB1增菌液。
布氏湯 規格: 250g 用途: 用于空腸彎菌培養及運動性觀察。(GB、ISO)
白介素1α(IL1α)重組蛋白 Recombinant Interleukin 1 Alpha (IL1a)
骨成型蛋白受體1B(BMPR1B)重組蛋白 Recombinant Bone Morphogenetic Protein Receptor 1B (BMPR1B)
凝血因子Ⅴ(F5)重組蛋白 Recombinant Coagulation Factor V (F5)
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。