注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
弗萊克索病毒PCR檢測試劑盒說明書 | Flexal Virus(FLEV)RTPCR | BK-P9172 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
酸黃連堿 CAS 1198398-71-8 * 規格: HPLC≥98%;20mg
丹參酚酸B甲酯 CAS * 規格: HPLC≥98%;20mg
氧化槐果堿 CAS 26904-64-3 * 規格: HPLC≥98%;20mg
D(十)-無水葡萄糖 CAS 50-99-7 * 規格: HPLC≥98%;100mg
花椒素 CAS 298-81-7 * 規格: HPLC≥98%;20mg
根皮素 CAS 60-82-2 * 規格: HPLC≥98%;20mg
白花前胡甲素 CAS 73069-25-7 * 規格: HPLC≥98%;20mg
異類葉升苷 CAS 61303-13-7 * 規格: HPLC≥98%;20mg
人參皂苷Rb1 CAS 41753-43-9 * 規格: HPLC≥98%;20mg
紫草素 CAS 517-89-5 * 規格: HPLC≥98%;20mg
甜菊苷 CAS 57817-89-7 * 規格: HPLC≥95%;20mg
莪術醇 CAS 4871-97-0 * 規格: HPLC≥98%;20mg
甘草素 CAS 578-86-9 * 規格: HPLC≥98%;20mg
對乙酰酚 CAS 103-90-2 * 規格: 20mg
L-鳥氨酸鹽 CAS 3184-13-2 * 規格: 20mg
弗萊克索病毒PCR檢測試劑盒說明書黑綠木霉刺芹側耳 Pleurotus eryngii
小鼠骨髓瘤細胞小鼠成纖維細胞
HL-60, 人早幼粒白血病細胞人腦動脈血管平滑肌細胞*培養基
嗜酸桿菌 Lactobacillus acidophilus熒光假單胞菌 Pseudomonas fluorescens
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna普通變形桿菌 Proteus vulgaris
SPC-A-1(人肺細胞)HHCC(人肝細胞)
薛瓦酵母 Saccharomyces chevalieri中國臺灣根霉 Rhizopus formosensis
中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii香菇 Lentinula edodes
IAR20(大鼠肝細胞)人胰島β細胞*培養基
香菇 Lentinula edodes人外周血白細胞*培養基
神經膠質瘤釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
人卵巢微血管內皮細胞*培養基香菇 Lentinula edodes
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeA2(人腺樣囊性細胞)
假單胞菌 Pseudomonas sp.糖化酵母 Saccharomyces diastaticus
HA Tag IP/Co-IP Kit/HA標簽免疫沉淀試劑盒苜蓿中華根瘤菌
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeRLFs, 大鼠肺成纖維細胞
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。