技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
三線鐮刀菌PCR檢測試劑盒說明書 | Fusarium tricinctumPCR | BK-P9196 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
蟾靈;Bufalin CAS 465-21-4 * 規格: 20mg
補骨脂二氫黃甲 ;Bavachini CAS 19879-30-2 * 規格: 20mg
白頭翁皂苷B4;Anemoside B4 CAS 129741-57-7 * 規格: 20mg
阿魏酸;Ferulic acid CAS 1135-24-6 * 規格: 50mg
磺草;純品型;標準品-甲磺草;有 CAS 104206-82-8 * 規格: 0.1g
藻醌;純品型;標準品;有證書 CAS 2797-51-5 * 規格: 0.1g
丙;純品型;標準品;有證書 CAS 51218-49-6 * 規格: 0.1g
丙森辛(異丙菌胺);純品型;標準品;有證 CAS 140923-17-7 * 規格: 0.1g
瘟靈;純品型;標準品;有證書 CAS 50512-35-1 * 規格: 0.1g
避蚊酯(鄰苯二二甲酯);純品型;標準 CAS 131-11-3 * 規格: 0.1g
烯丙;純品型;標準品;有證書 CAS 28434-00-6 * 規格: 0.1g
果;純品型;標準品;有證書 CAS 25954-13-6 * 規格: 0.1g
噻啉;純品型;標準品;有證書 CAS 111988-49-9 * 規格: 0.1g
梔子苷-對照品;有報告 CAS 24512-63-8 * 規格: 20mg
糖精鈉;純品型;標準品;有證書 CAS 82385-42-0 * 規格: 0.25g
三線鐮刀菌PCR檢測試劑盒說明書人神經膠質瘤細胞 U251
小鼠結腸細胞 CT-26 WT
細菌篩選培養基/Bacterium Screening MediumBR100克國產/進口
卵黃鈉瓊脂培養基/Egg-Yolk Salt Agar金黃色葡萄球菌的選擇性分離250克國產/進口
布氏菌選擇性培養基/Brucella Selective Medium布氏菌的選擇性分離培養250克國產/進口
CLED培養基/溴百里酚藍糖胱氨酸瓊脂/CLED Medium/BROLACIN Agar/Bromothymol-blue Lactose Cystine Agar/Cystine-Lactose-Electrolyte Deficient Agar尿液中微生物的選擇性分離培養250克國產/進口
人椎間盤髓核細胞*培養基100mL
小鼠胰腺星狀細胞*培養基100mL
四硫磺酸鈉亮綠增菌液 規格: 2X5支 用途: 含碘液2ml/支和煌綠1ml/支,2支添加于100mL(023031)中配成TTB
SCDLP液體培養基 規格: 250g 用途: 用于疏水性化妝品樣品處理及化妝品和一次性使用衛生用品增菌培養(化妝品衛生規范微生物檢驗方法2...
Toll樣受體2(TLR2)重組蛋白 Recombinant Toll Like Receptor 2 (TLR2)
脯氨酸/絲氨酸豐富卷螺旋蛋白1(PSRC1)重組蛋白 Recombinant Proline/Serine Rich Coiled Coil protein 1 (PSRC1)
粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF)重組蛋白 Recombinant Colony Stimulating Factor 2, Granulocyte Macrophage (GMCSF)
無翅型MMTV整合位點家族成員3(WNT3)重組蛋白 Recombinant Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 3 (WNT3)
ACHN(人腎細胞)5×106cells/瓶×2
S-180(小鼠瘤細胞)5×106cells/瓶×2