注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
粗球孢子菌PCR檢測試劑盒規格 | Coccidioides immitisPCR | BK-P9015 |
原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
V79(倉鼠肺細胞)5×106cells/瓶×2
YT瓊脂/YT AgarBR250克國產/進口
粘紅酵母 Rhodotorula glutinis
大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum豇豆慢生瘤菌 Bradyrhizo vigna
苜蓿中華瘤菌 Sinorhizobium melilotiRTE(大鼠氣管上皮細胞)
人盲腸腺細胞（未分）英文名稱：Hce-8693
LLC(小鼠肺細胞)5×106cells/瓶×2
MS1(小鼠胰島內細胞)5×106cells/瓶×2
大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum鏈霉菌 Streptomyces sp.
NCI-H446(人小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2gersion
Calu-1(人肺細胞)5×106cells/瓶×2
粗球孢子菌PCR檢測試劑盒規格6-氟-2-甲喹啉 161.18 6- -2- methyl group*：1128-61-6分子量： C10H8FN
2,4,5-三氟硝 177.08 2,4,5- three*：2105-61-5分子量： C6H2F3NO2
4-氟-2-硝三氟甲 209.1 4- -2- nitro three*：分子量： C7H3F4NO2
冬綠苷 Winter green 分子量：*：
連四硫酸鉀 302.45 Even four potassium sulfate*：13932-13-3分子量： K2O6S4
2,7-二溴-9-正辛咔唑 437.22 2,7- dibromo -9- octyl carbazole*：726169-75-1分子量： C20H23Br2N
5--2-硝三氟甲 206.12 5- amino -2- nitro three f*：393-11-3分子量： C7H5F3N2O2
對乙砜氯 204.67 On the basis of ethyl benzene*：7205-80-3分子量： C8H9ClO2S
2-乙氧甲酰 180.2 2-, ethyl*：21018-13-3分子量： C9H12O2N2
胭脂紅SX Rouge red SX 480.42分子量： C18H14N2Na2O7S2*：4548-53-2
乙硫 . 90.19分子量： C4H10S*：352-93-2
技術原理：
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。
