原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
馬隱秘桿菌PCR檢測試劑盒說明書 | Arcanobacterium equiPCR | BK-P8796 |
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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。
美利曲辛 CAS * 規(guī)格： 100mg
富馬酸喹平 CAS 111974-72-2 * 規(guī)格： 100mg
絡(luò)石藤 CAS * 規(guī)格： 1g
赤脛散 CAS * 規(guī)格： 0.2g
右旋糖酐分子量D2 CAS * 規(guī)格： 0.2g/支
蓮子心 CAS * 規(guī)格： 3g
廣藿香油 CAS 2233340 * 規(guī)格： 1ml
青 CAS * 規(guī)格： 100mg
*二化物 CAS 64806-05-9 * 規(guī)格： 50mg
芍藥苷 CAS 23180-57-6 * 規(guī)格： 20mg
當(dāng)藥苷 CAS 14215-86-2 * 規(guī)格： 20mg
* CAS 86189-69-7 * 規(guī)格： 100mg
五靈脂 CAS * 規(guī)格： 1g
5-｛4-［2-（5-乙基-2-基） CAS * 規(guī)格： 50mg
銀杏內(nèi)酯B CAS 15291-77-7 * 規(guī)格： 20mg
馬隱秘桿菌PCR檢測試劑盒說明書性 Acid black B 731.71分子量： C36H23N5Na2O6S2*：3071-73-6
性紅3B Acid red 3B 872.8271分子量： C40H34N4Na2O12*：6459-69-4
1-(甲酰甲)氯吡 172.61 1- (Xian Jiaji An Jijia)*：41220-29-5分子量： C7H9ClN2O
1-BOC-3- 210.27 1-BOC-3- cyano piperidine*：91419-53-3分子量： C11H18N2O2
* Fu Xiting 309.33分子量： C17H18F3NO*：54910-89-3
(S)-1-Boc-3-氨甲 214.3 (S) -1-Boc-3- ammonia methyl piperidine*：140645-24-5分子量： C11H22N2O2
1-甲-4-乙氧羰-5-磺吡唑 233.24 1- methyl -4- ethoxycarbonyl -5- pyrazole sulfonamide*：分子量： C7H11O4N3S
六氯錸(IV)酸鉀 477.12 Hexachloro rhenium (IV) acid potassium*：16940-97-9分子量： Cl6K2Re
1-芐氧-3- 310.13 1- benzyloxyl iodobenzene -3-*：107623-21-2分子量： C13H11IO
肉蓯蓉苷A Boschnaloside A 分子量：*：14-1001
β-倒捻子素 Beta a-mangostin 424.4902分子量：C25H28O6*：20931-37-7
