原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
侵入性絲囊霉菌PCR檢測試劑盒價(jià)格 | Aphanomyces invadansPCR | BK-P8794 |
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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。
TE-13(人食管細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
L-酪氨酸營養(yǎng)瓊脂配套試劑 規(guī)格： 10支/盒 用途： L-酪氨酸營養(yǎng)瓊脂基礎(chǔ)配套試劑
無菌兔血清/Sterile Defidrinated Rabbit BloodBR100/400毫升國產(chǎn)/進(jìn)口
人外周血白細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
彎曲桿菌 Lactobacillus curvatus神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞
MCF-7 [MCF7], 人腺細(xì)胞系宇佐美曲霉變種 Aspergillus usamii var.
SK-OV-3(人卵巢細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
GoldCassette-GST/GST重組標(biāo)簽蛋白快速檢測試劑盒(裝)CCD-1095Sk(人腺浸潤性導(dǎo)管旁皮膚細(xì)胞)
Cary-Blair氏運(yùn)送培養(yǎng)基/Cary-Blair Transfort Medium運(yùn)送腸道致病菌標(biāo)本250克國產(chǎn)/進(jìn)口
Poly-D-lysine溶規(guī)格：2mggersion
叉框蛋白O1(FOXO1)重組蛋白英文名稱：Recombinant Forkhead Box Protein O1 (FOXO1)
侵入性絲囊霉菌PCR檢測試劑盒價(jià)格3--2-氯吡 128.56 3- amino -2-*：6298-19-7分子量： C5H5ClN2
2-甲喹啉 143.19 2- methyl group*：91-63-4分子量： C10H9N
3--5-(4-溴)異噁唑 239.07 3- - -5- (4- Bromophenyl) isoxazole*：6525-98-0分子量： C9H7BrN2O
反-十氫萘 138.25 Trans ten hydrogenation of naphthalene*：493-02-7分子量： C10H18
鋁酞菁 Aluminum phthalocyanine 574.97分子量： C32H16AlClN8*：14154-42-8
藥堿 Hydrochloric acid 373.8301分子量：C20H20ClNO4*：6681-15-8
性紅33 Acid red 33 467.38分子量： C16H11N3Na2O7S2*：3567-66-6
4-甲氧-3,5-二甲-2-吡甲 167.21 4- methyl -3,5- two methyl -2- pyridine methanol*：86604-78-6分子量： C9H13NO2
1-[(2-乙己)氧]-4-甲氧 236.35 1-[(2- ethylhexyl) oxygen]-4- dimethoxybenzene*：146370-51-6分子量： CH3OC6H4OCH2CH(C2H5)(CH2)3CH3
紫杉 Taxol 853.91分子量：C47H51NO14*：33069-62-4
1-Boc-3-甲 214.3 1-Boc-3- methyl piperidine*：392331-89-4分子量： C11H22N2O2
