本產品采用層析式雙抗體夾心法檢測Cas12/13的標記探針。用戶僅需在探針設計時將一端標記生物su(Biotin),另一端標記異硫氰酸熒光素(FITC)或6-羧基熒光素(6-FAM),即可使用本產品檢測目的基因LAMP、RAA或RPA等溫擴增后的Cas酶切產物。
預期用途:
核酸擴增產物的檢測。
包裝規格/貨號:
包裝規格:10條/包×5,鋁箔袋防潮包裝。
圖1. 一次性檢測試紙條結構示意圖
儲存條件及有效期:
儲存條件:存放于避光干燥處,儲存溫度4~30℃。
有效期:12個月。
操作步驟:
根據檢測樣品數量取出相應數量的試紙條,并在吸收墊(圖1)上做好標記。每根試紙條只能用于單次、單個樣品的檢測。擴增產物體積為50~100µL時,可直接在200µL PCR反應管中檢測核酸產物,產物體積不足50µL時,需在PCR管內加超純水補足體積至50µL,吸打混勻后,才能進行檢測。
PCR、RPA或RAA反應結束后,打開PCR反應管,將試紙條結合墊端(箭頭端)插入PCR反應管(圖1),液面不得超過結合墊上端,待判讀區全部浸潤(約需1~2min,外界環境溫度較低時,如冬季,會降低吸水速度,判讀區浸潤時間將會延長),待質控線(C線)顯色后,可以將試紙條拿出。根據試紙條顯情況直接讀取檢測結果。
質控線(T線)顯色后10min內觀察結果,10min后判讀無效。
記錄檢測結果,將試紙條密封丟棄在安全處。
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結果判讀:
圖2. Cas12/13檢測試紙條結果判讀示意圖
陽性(+):
C線)和檢測線(T線)均出現紅色條帶;試紙條質控線(C線)不顯色,檢測線(T線)出現紅色條帶。上述兩種情況均說明Cas12/13可進行有效切割,并激活報告基團顯色,結果均可判定為陽性。
陰性(-):
C線)出現一條紅色條帶,檢測線(T線)不顯色,判定為陰性結果。該結果表明Cas12/13未能切割報告分子,未能激活報告基團顯色。
無效:
C線)和檢測線(T線)均未出現條帶,提示所用的試紙條或擴增試劑可能已經損壞、失效或操作有誤。此時,應仔細閱讀說明書,重新擴增和檢測。如果問題仍然存在,應立即停止使用同一批號的產品。
注意事項及安全提示:
本產品應結合探針使用,如探針合成純度不足,即探針含游離的Biotin或者游離的FITC時,會導致以超純水作陰性對照的切割產物T線顯紅色,即陰性對照呈現假陽性結果。
本產品可用于探針合成質量的檢測。調整空白陰性對照中探針的使用濃度至200 nM,并進行切割反應。當試紙條結合墊端浸入Cas12/Cas13切割產物后的5~7 min內,試紙條T線顯紅色,即說明探針純度難以滿足實驗要求,會因探針純度不足導致假陽性結果。建議更換探針合成供應商,并重新合成探針。本產品在探針使用濃度為20~50nM的情況下,試紙條結合墊端浸入Cas12/Cas13切割產物后的30 min內,T線均不會顯色。
本產品僅供科研使用。使用前請仔細閱讀說明書,嚴格按照說明書操作。違反或者未按說明書進行操作可能導致錯誤結果。
產品應依照說明書要求,儲存于合適的環境和溫度下,并在有效期內使用。儲存不當或產品過期可能導致錯誤結果。打開包裝后請盡快使用試紙條,以免因試紙條受潮影響試驗結果。檢測環境光線不足,操作者色弱等因素均可能導致錯誤結果。
使用完畢后,應盡快將紙條裝進密封袋,妥善處理。本產品為一次性使用產品,請勿重復使用。