Hoechst 33342/PI Double Stain Kit細胞凋亡雙染試劑盒
產品標簽
Hoechst 33342/PI凋亡檢測試劑盒，JC-1膜電位檢測；Annexin V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒；TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒；
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hoechst 33342/PI Double Stain Kit 細胞凋亡雙染試劑盒 | MX3201-100T | 100T | 318 |
產品描述
Hoechst 33342/PI細胞凋亡雙染試劑盒（Hoechst 33342/PI Double Stain Kit）是一種采用Hoechst 33342和碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）雙染進行細胞凋亡與壞死分析的檢測試劑盒。檢測原理在于：Hoechst 33342是一種活細胞核染料，能穿透正常細胞以及凋亡細胞膜，與DNA結合（很大激發波長為350nm，發射波長為461nm），呈現藍色熒光。當細胞發生凋亡，染色質發生固縮，染色后的細胞熒光比正常細胞明顯增強。而PI是一種死細胞核染料，不能穿透細胞膜，對于具完整細胞膜的正常細胞或凋亡細胞不能染色。但對于壞死細胞，由于膜的完整性喪失，PI能夠穿透進入細胞，與DNA結合（很大激發波長為536nm，發射波長為617nm），呈現紅色熒光。經Hoechst 33342/PI雙染后，使用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測，正常細胞為弱紅色熒光+弱藍色熒光；凋亡細胞為弱紅色熒光+強藍色熒光；壞死細胞為強紅色熒光+弱藍色熒光。
本試劑盒可檢測100個樣品，每個樣本的細胞數量可為0.1~1×06。
產品包裝
編號 | 組分名稱 | 規格 | 保存方法 |
MX3201-A | Cell Stain Buffer 細胞染色緩沖液（2×） | 100ml | 4℃或-20℃ |
MX3201-B | Hoechst 33342 Stain Hoechst染色液 | 0.5ml | -20℃避光 |
MX3201-C | PI Stain PI染色液 | 0.5ml | -20℃避光 |
注意事項
熒光染料均存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。
Hoechst 33342孵育細胞時間不宜過長，一般控制在20min內。太長容易引起探針的發射光譜由藍光向紅光遷移，導致紅色熒光與藍色熒光的比例改變。
PI對人體有一定的刺激性，請注意適當防護。
如果要進行組織的凋亡和壞死檢測，請將組織消化制備成單細胞懸液后再檢測。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
注意事項
1）本品不是臨床藥物，只能用于科研用途，不能用于診斷或臨床用途。
2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、細胞樣本制備
1.1 貼壁細胞
1.1.1 小心收集細胞培養液到一個無菌離心管內備用；
1.1.2 用yi蛋白酶消化細胞至細胞可以輕輕用移液槍或槍頭吹打下來，加入前面收集的細胞培養液，吹打下所有貼壁細胞，并輕輕吹散細胞
1.1.3 收集上述細胞懸液到離心管內，4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底，小心吸取上清并丟棄，可留約50μl培養液，以免吸走細胞。【注意】：某些特殊細胞，如果沉淀不充分，可以適當提高離心力或者延長離心時間。
1.1.4 加入約1ml提前預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5ml無菌離心管，4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底。
1.1.5 小心吸取上清并丟棄，可留約50μl PBS，以免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。
1.2 懸浮細胞
1.2.1 4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底，小心吸取上清并丟棄，可留約50μl培養液，以免吸走細胞。
1.2.2 加入約1ml提前預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5ml無菌離心管，4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底。
1.2.3 小心吸取上清并丟棄，可留約50μl PBS，以免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。
二、染色前制備
2.1細胞染色緩沖液（1×）的準備：取適量細胞染色緩沖液（2×）與無菌去離子水或蒸餾水等比例混合，即為細胞染色緩沖液（1×），4℃保存備用。
2.2 細胞重懸：將上述收集好的0.1~1×06細胞，加入0.9ml 細胞染色緩沖液（1×），重懸細胞沉淀。
三、Hoechst 33342/PI雙染
3.1 加入5μl Hoechst 33342染色液，置于37℃水浴，孵育5~15min。
3.2 置于冰水冷卻，4℃，1000g離心3~5min，使細胞沉至管底，棄上層染色液。
3.3 加入0.9ml 細胞染色緩沖液（1×），重懸細胞沉淀。
3.4 加入5μl PI染色液，置于冰浴或4℃，孵育20~30min。
【注意】：也可一步法進行染色：加入5μl Hoechst 33342染色液和5μl PI染色液，輕輕混勻，置于冰浴或4℃，孵育20~30min。
四、結果分析
4.1 流式細胞儀檢測
用流式細胞儀在激發波長400~500nm處檢測藍色熒光，在＞630nm處檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。
4.2 熒光顯微鏡檢測
檢測前，4℃，1000g離心3～5min沉淀細胞，用PBS洗滌一次，再涂片觀察紅色和藍色熒光。
【注意】：對于貼壁細胞，也可不收集細胞，棄培養液后直接依次按照上述比例加入細胞染色緩沖液（1×）、Hoechst 33342染色液、PI染色液，置于冰浴或4℃，孵育20～30min。染色后，PBS洗滌一次，再在熒光顯微鏡下觀察。
4.3 結果呈現
正常細胞呈低藍光/低紅光，凋亡細胞呈高藍光/低紅光；壞死細胞呈低藍光/高紅光。
相關產品
貨號 | 名稱 | 規格 |
MX3210-20T | Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit 細胞凋亡檢測試劑盒 | 20T |
MX3212-20T | Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit 細胞凋亡檢測試劑盒 | 20T |
MX3214-30T | Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit 細胞凋亡檢測試劑盒 | 30T |
MX3216-20T | TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC) 細胞凋亡檢測試劑盒（綠色熒光） | 20T |
MX3221-20T | Apoptotic DNA-Ladder Detection Kit 細胞凋亡DNA-Ladder檢測試劑盒 | 20T |
MX3204-100T | JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒 | 100T |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。
細胞凋亡雙染試劑盒
細胞凋亡雙染試劑盒
