Cyanine7 NHS Ester Cy7 NHS酯（脂溶性）
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Cyanine7 NHS Ester Cy7 NHS酯（脂溶性） | MX4669-1MG | 1mg | 1100 |
Cyanine7 NHS Ester Cy7 NHS酯（脂溶性） | MX4669-5MG | 5mg | 2900 |
1）吲哚啉環(huán)氮原子上取代基引入乙氧基，結(jié)構(gòu)同Amershan Pharmacia的花菁類染料，應(yīng)用于基因芯片的雙色熒光檢測。結(jié)構(gòu)同美國化學(xué)會注冊CAS號對應(yīng)結(jié)構(gòu)。乙氧基形式的花菁類染料比甲基形式（比如Lumiprobe公司）表現(xiàn)出更好的光穩(wěn)定性，色牢度，且能更好的防止染料自聚。
2）從化學(xué)合成和分離純化角度來看，乙氧基形式的花菁類染料比甲基形式要求更高，合成難度更大，成本也隨之提高，但我司在保質(zhì)的基礎(chǔ)上仍以更有競爭力的價格提供此系列的花菁類染料，歡迎所有科研用戶使用我司的產(chǎn)品。
產(chǎn)品描述
花菁類染料（Cyanine Dyes）是一種在兩個氮原子間含聚亞甲基橋鍵且攜帶一非定域電荷的分子【見下圖】。
歸其結(jié)構(gòu)特征，花菁素具有極其高的消光系數(shù)通常高于100,000 L?mol-1?cm-1。不同的替代基允許控制發(fā)光團(tuán)的性能比如吸光波長，光穩(wěn)定性和熒光強(qiáng)度。例如，通過選擇不同長度的聚亞甲基橋鍵能夠控制吸光和熒光波長：花菁素越長，吸光和發(fā)射波長更高，高達(dá)至近紅外區(qū)。
在生命科學(xué)領(lǐng)域廣受歡迎的花菁類染料由美國卡耐基梅隆大學(xué)（CMU）的Alan Waggoner教授和同事于二十世紀(jì)90年代早期研發(fā)應(yīng)用。這些染料呈現(xiàn)出低的生物分子非特異性結(jié)合，并由其巨大的消光系數(shù)和良好的量子產(chǎn)量產(chǎn)生明亮的熒光。目前商業(yè)化可提供各種反應(yīng)性衍生物，比如點(diǎn)擊化學(xué)用的N-羥基琥珀酰亞胺酯，馬來酰亞胺，疊氮化物和其他衍生物。目前花菁染料常以兩種異構(gòu)體的形式供應(yīng)：一種非磺化的花菁類染料和磺化的花菁類染料，對于許多應(yīng)用，兩種是可以互相替換的，因其光譜屬性基本相同。兩種染料都可用于DNA和蛋白質(zhì)等生物分子的標(biāo)記。兩者的區(qū)別在于溶解度：磺化染料具水溶性，可以在水環(huán)境中標(biāo)記，無需有機(jī)共溶劑，且在水中不易聚集。
Cyanine7是一種脂溶性的，近紅外（NIR）發(fā)射波長的熒光染料。Cyanine7 NHS Ester是Cyanine7的胺反應(yīng)活化酯，用于標(biāo)記生物分子的氨基基團(tuán)，需要在有機(jī)共溶劑的體系內(nèi)進(jìn)行標(biāo)記。標(biāo)記好的分子適用于各種體內(nèi)研究和藥物設(shè)計相關(guān)的實(shí)驗。若是需要純水溶性的標(biāo)記體系，請選擇水溶性的Sulfo-Cyanine7 NHS Ester（Cat#：MX4659-1MG）。
產(chǎn)品特性
1） CAS NO：N/A
2） 同義名：Cyanine7 NHS ester; Cy7 NHS ester; Cy7 SE; Cyanine7 N-hydroxysuccinimide ester; Cy7琥珀酰亞胺酯；Cy7 NHS酯；
3） 分子式：C39H46IN3O4
4） 分子量：747.72 g/mol
5） 純度：≥95%
6） 外觀：深綠色粉末或固體
7） 溶解性：溶于DMF，DMSO，幾乎不溶于水
8） Ex/Em：747/774 nm
9） 消光系數(shù)：200, 000 L?mol-1?cm-1
10） A280/Amax：11%
11） 光譜相似染料：Alexa Fluor® 750, IRDye® 750RD, CF™ 750 Dye, DyLight™ 750
注意事項
Cyanine7 NHS Ester是脂溶性的，先用有機(jī)溶劑如DMSO，DMF配制成母液后，再加入水溶性反應(yīng)溶液內(nèi)。純有機(jī)溶劑的母液置于-20℃避光保存，好2周內(nèi)用完，避免反復(fù)凍融。水溶性反應(yīng)液必須現(xiàn)配現(xiàn)用，盡快用完。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
【注意】：Cy染料和生物分子的比例（F/P）=4~12之間熒光強(qiáng)度高。F/P過高，熒光探針會自我淬滅并且影響生物分子的活性。CyDye NHS在pH 8.5~9.4內(nèi)標(biāo)記抗體10min，F(xiàn)/P可達(dá)5~6。但在pH 7.0內(nèi)幾乎無反應(yīng)。我司（懋康生物）內(nèi)部使用Cy3 NHS標(biāo)記Anti-GST抗體發(fā)現(xiàn)按1:1，1:5，1:10，和1:20標(biāo)記得到的F/P分別為0.28:1，1.16:1，2.3:1和4.6:1。
水溶性Cy3 NHS標(biāo)記Anti-GST抗體【其它CyDye NHS參考此方法進(jìn)行并做適當(dāng)摸索】
商業(yè)化購買的抗體如果含有其他蛋白（如血清白蛋白，明膠等），或溶于帶氨基的緩沖液，會影響標(biāo)記。需在標(biāo)記前對抗體進(jìn)行純化。
于1L 0.15M NaCl溶液中透析Anti-GST（0.5ml，3mg/ml），室溫或4℃透析4h。
換用1L 新鮮的0.15M NaCl溶液，4℃透析過夜。
第二天再換用1L 0.1M NaHCO3（pH 8.3），4℃透析4h。
【可選】用0.22μm低吸附濾膜過濾透析后的抗體溶液。
用0.1M NaHCO3（pH 8.3）稀釋少量的抗體，于280nm測其紫外吸收值并計算標(biāo)記抗體的總量（IgG抗體摩爾吸光系數(shù)為170,000 at 280nm）。
用DMSO配制Cy3 NHS（Mw:765.95），濃度為10mg/ml。根據(jù)CyDye NHS和抗體的使用比值（比如1:20）來計算所需要染料的體積。然后慢慢將其加入到抗體溶液中，同時于暗處低速攪拌，室溫45min。
用1L 0.15M NaCl溶液，常溫或4℃避光透析4h，以除去未標(biāo)記上的Cy3 NHS。
換用新鮮的1L 0.15M NaCl溶液，4℃避光透析過夜。
換用1L 0.01M PBS/0.01% NaN3溶液室溫或4℃避光透析4h，然后在4℃避光再次透析過夜。
【可選】用0.22μm低吸附濾膜過濾透析后的抗體溶液。
用0.01M PBS/0.01% NaN3溶液整數(shù)倍稀釋標(biāo)記抗體，測定280nm（蛋白）和552nm（Cy3）處的紫外可見吸光度。
產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或置于0.01M PBS/0.01% NaN3溶液中，-20℃避光保存。
水溶性Cy5 NHS標(biāo)記（D-ser2）- Leu-Enkephalin【其它CyDye NHS參考此方法進(jìn)行并做適當(dāng)摸索】
低溫保存的Cy5 NHS置于室溫回溫至少20min。往1mg粉末內(nèi)加入400μl 高品質(zhì)無水DMSO充分溶解。同樣，低溫保存的玻璃瓶裝的（D-ser2）- Leu-Enkephalin（YSGFLT，0.75mg）室溫回溫后加入400μl 高品質(zhì)無水DMSO充分溶解。將400μl Cy5 NHS加入400μl 多肽內(nèi)。【染料與多肽通常質(zhì)量比1:1】。
再加入15μl 三乙胺，常溫避光攪拌反應(yīng)混合物，過夜。【若多肽穩(wěn)定性較弱，則于4℃反應(yīng)過夜】。
用HPLC純度多肽。使用C18柱子（25cm×10mm），每次上樣注入2×400μl，30min梯度洗脫從0.1% TFA水溶液到MeCN:H2O (0.1% TFA)=70：30，流速4ml/min。（對不同的多肽選擇不同的合適HPLC梯度流動相）
收集適當(dāng)?shù)纳珟Х澹瑯?biāo)記多肽的保留時間比未標(biāo)記的多肽長。
產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或置于水溶液中，-20℃避光保存。必要時可用質(zhì)譜表征。
CyDye標(biāo)記的蛋白/多肽穩(wěn)定性取決于蛋白本身。例如標(biāo)記的IgG在4℃可避光保存2月，更長保存需加入等體積甘油-20℃避光保存。
【F/P計算】：
Cy5在650nm下的摩爾吸光系數(shù)為250,000 L?mol-1?cm-1，此蛋白在280nm的摩爾吸光系數(shù)為170,000 L?mol-1?cm-1，不同蛋白的摩爾吸光系數(shù)不同。Cy5本身在280nm處的吸收是650nm處的5%。按照以下公式計算F/P值。
[Cy5] = A650/250000; [Peptide] = [A280-(0.05×A650)]/170000
F/Pfinal = [Cy5]/ [Peptide]= [0.68×A650]/ [A280-(0.05×A650)]
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貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
Cyanine7 NHS Ester Cy7 NHS酯熒光探針
Cyanine7 NHS Ester Cy7 NHS酯熒光探針
