超微量分光光度計(jì)因?yàn)闊晒夥治龇ǖ撵`敏度高，其檢出限通常比分光光度法低2～4個(gè)數(shù)量級，選擇性也比分光光度法好，這是由于：a 熒光分析儀器在與激發(fā)光相垂直的方向測量熒光，與分光光度在一直線上測量相比，消除了透射光的影響，測量更為準(zhǔn)確，靈敏度高；b 吸光光度法只采用一個(gè)單色器，而熒光分析儀器有兩個(gè)單色器，分別用于獲得單色性較好的激發(fā)光和分出某一波長的熒光，消除其它雜散光的干擾，其儀器的準(zhǔn)確度、靈敏度也更高
超微量分光光度計(jì)
物質(zhì)對光的選擇性吸收波長，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。
核酸的定量是分光光度計(jì)使用頻率高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。如：1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。
測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度。測試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾后測試空白液和樣品液。然而，實(shí)驗(yàn)并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者頭痛的問題。靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。
