利用噬菌體表面展示技術從人肝癌T7 cDNA文庫中篩選出能與人CD8+T淋巴細胞特異結合的蛋白分子.方法:以人CD8+T淋巴細胞為篩選靶標,對人肝癌T7 cDNA噬菌體肽庫進行4輪“吸附-洗脫-擴增”生物淘選與富集,ELISA鑒定特異結合的噬菌體單克隆;對獲得的陽性克隆裂解液進行PCR擴增及DNA測序,然后進行生物信息學分析,確定所編碼的結合蛋白.結果:經過4輪篩選,結合人CD8+T淋巴細胞的噬菌體克隆得到富集,通過測序與同源性比對分析獲得17個特異性結合的多肽序列;生物信息學分析發現陽性噬菌體克隆的同源蛋白中,可能與肝癌免疫逃逸相關的分子有Unc-51樣自噬活化激酶1(ULK1)、一般受體磷酸肌醇相關支架蛋白1(GRASP)、中間α球蛋白抑制因子H1(ITIH1)、富含*重復8家族成員D(LRRC8D)和CD164等.結論:從人肝癌T7 cDNA噬菌體肽庫中篩選獲得了能與人CD8+T淋巴細胞特異結合的分子,為闡明人肝癌發生發展過程中腫瘤免疫逃逸相關機制奠定了基礎.
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