探求白細胞介素-37(interleukin-37,IL-37)在人外周血CD4~+效應T細胞(effector T cells)中的表達情況.2.研究在脂多糖(LPS)刺激下,CD4~+效應T細胞活化程度與IL-37表達水平的時效關系.3.證明IL-37可以抑制CD4~+效應T細胞發揮免疫效應.方法:部分:分離健康志愿者外周血單個核細胞(PBMC),采用免疫磁珠分選分選CD4~+T淋巴細胞,通過胎盤藍檢測細胞活性,應用流式細胞技術檢測CD4~+效應T細胞純度.1.增殖活性檢測:設置刺激劑組(脂多糖-LPS:1ug/ml),陰性對照組(即無LPS刺激細胞組),通過CCK-8技術檢測不同分組之間CD4~+T淋巴細胞增殖活性差異,得出刺激時間(24h,48h,72h)與細胞增殖活性時效關系.2.IL-37基因水平表達情況:通過PCR技術明確CD4~+效應T細胞中IL-37mRNA的表達.3.IL-37蛋白水平表達情況:分別通過Western blot技術和流式細胞技術檢測LPS刺激下,不同刺激時間下(24h,48h,72h)效應T淋巴細胞中IL-37蛋白表達水平差異.4.IL-37細胞內表達定位:通過免疫熒光與激光掃描共聚焦技術檢測IL-37蛋白在效應T淋巴細胞中表達情況,明確其表達位置.第二部分:分離健康志愿者外周血單個核細胞(PBMC),應用免疫磁珠分選技術獲得CD4~+效應T細胞,應用小分子干擾RNA沉默效應T細胞中IL-37的表達,另設置siRNA-scramble無效干擾細胞組,正常對照細胞組
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