目的在甲醇營養(yǎng)型畢氏酵母蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)中高效表達(dá)人白細(xì)胞介素-11(rhIL-11),便于進(jìn)一步開發(fā).方法以人工設(shè)計(jì)合成的rhIL-11基因,構(gòu)建表達(dá)載體pPICZαA-IL-11,經(jīng)線性化后電轉(zhuǎn)化導(dǎo)入畢氏酵母菌株KM71,甲醇誘導(dǎo)表達(dá),用ELISA和SDS-PAGE檢測發(fā)酵上清中IL-11的抗原性和表達(dá)量,用IL-11依賴的B9-11細(xì)胞株分析其生物學(xué)活性,采用疏水層析,離子交換和凝膠過濾純化發(fā)酵上清中的IL-11.結(jié)果序列分析表明,克隆載體中IL-11人工基因序列與設(shè)計(jì)相符;基因工程菌株KM71-2424在搖瓶培養(yǎng)上清中IL-11的表達(dá)量超過60mg/L,生物學(xué)活性測定顯示其比活性為5.5×107U/mg,而標(biāo)準(zhǔn)品的生物學(xué)活性為2.2×107 U/mg.經(jīng)過三步層析純化得到電泳純的rhIL-11蛋白質(zhì).結(jié)論成功獲得IL-11人工基因和穩(wěn)定分泌重組蛋白的基因工程菌株KM71-2424,該重組蛋白的生物學(xué)活性顯著高于大腸桿菌表達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)品,并獲得較高純度的重組蛋白
廈門侖昌碩生物科技有限公司集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)及品牌代理為一體的生物技術(shù)公司,目前可提供各種抗體、免疫學(xué)相關(guān)的檢測試劑盒、胎牛血清,動(dòng)物抗血清等高品質(zhì)產(chǎn)品及服務(wù),涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。
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