BCIP/NBT顯色試劑盒藍紫色(IHC)免疫檢測

商品介紹：

本試劑盒采用液體性滴瓶包裝，使用方便。5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽（BCIP）/硝基四氮唑藍（NBT）是堿性磷酸酶的佳底物組合之一，BCIP在AP的催化下生成強反應性深藍色產物，后者與氧化劑硝基四氮唑藍（NBT）反應亦生成深藍色產物，從而進一步增強了顯色，使之呈現鮮艷的藍紫色，廣泛用于組化實驗中的堿性磷酸酶顯色步驟。

商品屬性：

操作方法

1）堿性磷酸酶的檢測完成后，TBS充分洗滌，5min/次，共4次。【注】：不得使用磷酸鹽緩沖液。

2）按1ml 蒸餾水加1滴36301-A和1滴36301-B，混勻，加至標本上。一般避光顯色10-30min。若無背景出現則可繼續顯色。直至顯色滿意為止。

3）蒸餾水充分洗滌以終止反應。必要時核固紅復染。

4）封片劑封片，觀察。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

步驟和注意事項：?

準備實驗環境：?確保實驗區域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養：?

準備試管或培養皿、?細胞培養基和待培養的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養基和細胞種植在試管或培養皿中。?

將試管或培養皿放置于恒溫培養箱中，?定期更換培養液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融”，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養細胞或收集懸浮培養細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環境的清潔和安全

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