二乙酸熒光素(FDA)免疫檢測

商品屬性：

商品介紹：

產品性狀：白色固體粉末

產品保存：避光-20℃保存，一年有效

產品說明：

二乙酸熒光素(Fluorescein Diacetate,FDA)是一種常用的培養動植物細胞以及植物細胞原生質體的生活力鑒定染料，其染色機理也利用了死活細胞在代謝上的差異：FDA本身不產生熒光，也無極性，能自由滲透出入完整的細胞膜。當 FDA 進入活細胞后，被細胞內的脂酶分解，生成有極性的、能產生熒光的物質——熒光素，該物質不能自由透過活的細胞膜，積累在細胞膜內，因而使有活力的細胞產生綠色熒光；而無活力的細胞因不能使 FDA 分解，而無法產生熒光。FDA 也可用于流式細胞儀。熒光素的激發和發射波長分別是 488nm和 530nm。

使用方法：

(1)配制溶液：將 FDA 溶于酮中，配成濃度為5 mg./ml的溶液，置于 4℃冰箱中保存。染色時將 FDA 加入到細胞液中，使其終濃度為100μg/ml。

(2)活細胞染色：取處于對數增長期的細胞液，離心濃縮，生理鹽水清洗1次，加入 FDA，在室溫黑暗處放置 5 min 染色；染色后離心，生理鹽水清洗1-2次，后用蒸餾水懸浮細胞，涂片觀察。

(3)死亡細胞胞染色：取魯哥氏溶液固定的死亡細胞按活細胞相同的方法進行染色。

(4)觀察：用熒光顯微鏡觀察和拍照(明場和熒光分別拍照，物鏡使用 20×)。活細胞被 FDA 染成亮綠色，當細胞膜受損，熒光素無法在細胞內累積，而使細胞無法發出熒光。活性高的細胞發出強烈的綠色熒光，活性弱或死亡的細胞發光較弱或不發光。

注意事項：

(1)使用方法可依據細胞的具體情況適當調整。

(2)魯哥氏即 Lugol’s 溶液，也就是碘液。取 6 克碘鉀溶于 20 毫升蒸餾水中，攪拌到溶解后，加入 4 克碘，等碘充分溶解，再加入 80 毫升蒸餾水，貯存在棕色試劑瓶內。

步驟和注意事項：?

準備實驗環境：?確保實驗區域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養：?

準備試管或培養皿、?細胞培養基和待培養的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養基和細胞種植在試管或培養皿中。?

將試管或培養皿放置于恒溫培養箱中，?定期更換培養液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融”，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養細胞或收集懸浮培養細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環境的清潔和安全

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