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產品貨號:BYS-10007B
試劑盒保存:2-8℃
常用規格:96T/48T
elisa試劑盒 特點:敏感性高,特異性強,重復性好的實驗,售后:產品質量嚴謹,如有質量問題(非人為因素)免費退換
實驗:免費提供人白細胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA檢測試劑盒代測服務
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做ELISA的經驗總結:
1、包被原的性質很重要,蛋白濃度,是否降解,這關系到你做出的抗體可不可以被其識破,所以保存抗原很重要,做重組蛋白時,一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。
2、包被液的選擇,一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液,但有時由于試驗的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖液來包。應注意以下原理:由于蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用,這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響,大分子蛋白質部較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團,骨更易吸附到固相載體表面。
3、封閉:繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙,從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質的在吸附。常用封閉劑有0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉,比較廉價,可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。但終選用什么,要依據試驗具體來實踐。
4、洗滌板:可以說是ELISA操作中,洗滌是主要的關鍵技術。因為聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,為達到分離游離的和結合的酶標記物的目的,清除殘留在板孔中游離的物質,以及非特異性的吸附的干擾物質,在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。所以在洗板時會有一定誤差,人為因素很大(當然有條件的用洗板機除外),洗的不徹底或串了孔,對如此靈敏的ELISA系統可是不小的影響。
5、加抗體標本(和二抗):注意該換槍頭時換槍頭。標本稀釋一般可用pbs稀釋,也可用封閉液去稀釋。如需加二抗,還要注意二抗的工作濃度,太高浪費,太低則著色淺。
6、顯色:顯色系統有很多,我們一開始的時候,要選擇適宜的顯色系統。注意顯色系統酶活性底物的保存HRP結合物加硫柳泵,AP結合物可加疊氮鈉。
7、每次做盡量要把陰陽空三個對照做好,如出現問題也好分析。
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人白細胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA試劑盒 酶標板可以拆卸,分幾次用,如果設立雙標準,可以做三次;如果設定單標準,可以做6次
標準曲線擬合的四種:對數,指數,二次函數和直線
試劑盒應用用于:實驗室研究使用。
實驗儀器:酶標儀、洗板機、離心機、培養箱等
試劑盒檢測:操作簡單、快速、敏感性高、特異性強
elisa原理:應用雙抗體夾心法測定標本中ALCAM盒水平。
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有效期:6個月