產品信息
貨號 | 名稱 | 規格 | 價格 |
wb30310-25ku | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 25KU | 980 |
wb30310-50ku | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 50 KU | 1600 |
wb30310-100ku | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 100 KU | 2800 |
wb30310-200ku | Benzonase Nuclease 全能核酸酶 | 200 KU | 5000 |
產品簡介：
本產品由經基因工程改造的真核生物酵母菌表達純化所得，不含原核生物表達體系自身的細菌內毒素，不僅應用在科研研究中，作為培養細胞上清和細胞裂解液去粘度的酶制劑，去除核酸干擾提高后續蛋白純化或功能研究；而且應用在疫苗工業、蛋白和多糖類制藥工業，去除宿主殘留核酸，大大降低疫苗和蛋白類產品核酸污染至皮克級別，提高制品生物功效。
本品以無菌液體酶的形式提供，儲存于緩沖液（20mM Tris-Cl pH8.0，2mM MgCl2，2mM NaCl，50%甘油）中，無色透明液體。
全能核酸酶作用條件
條件參數 | 適條件 | 可作用條件 |
Mg2+ | 1-2 mM | 1-10 mM |
pH | 8.0-9.2 | 6.0-10.0 |
Temp | 37℃ | 0-42℃ |
DTT | 0-100 mM | >100 mM |
β-Mercaptoethanol | 0-100 mM | >100 mM |
Monovalent cation（Na+，K+） | 0-20 mM | 0-150 mM |
PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
注：1）適條件為全能核酸酶釋放≥90%活力的條件，可作用條件為全能核酸酶釋放≥15%活力的條件；2）全能核酸酶活力定義為在37℃，pH 8.0反應條件，2.625 mL反應體系中，在30 min內使△A260吸收值變化1.0（相當于*消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個活性單位（U）。
產品性質
英文別名（English Synonym） | BenzNuclease; Universal Nuclease; Benzonase endonuclease |
CAS號（CAS NO.） | 9025-65-4 |
分子量（Molecular Weight） | 27.9 kDa |
純度（Purity） | ≥90%（SDS-PAGE） |
酶活（Enzyme Activity） | ≥250 U/μL |
比活（Specific Activity） | ≥1.0×106 U/mg蛋白 |
蛋白酶（Protease） |
|
內毒素（Endotoxin） | Undetected（鱟試劑法） |
適pH（Optimum pH） | 8.0（工作范圍 |
適溫度（Optimum Temperature） | 37℃（工作范圍0-42℃） |
輔助因子（Cofactor） | 1-10 mM Mg2+ |
儲存緩沖液（Storage Buffer） | 20 mM Tris-Cl pH8.0，2 mM MgCl2，2 mM NaCl，50%甘油 |
稀釋緩沖液（Dilution Buffer） | 20 mM Tris-Cl pH8.0，2 mM MgCl2，2 mM NaCl |
活性單位定義（Unit Definition） | 在37℃，pH 8.0反應條件，2.625 mL反應體系中，在30 min內使△A260吸收值變化1.0（相當于*消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個活性單位（U）。 |
使用方法
1）細胞處理：a.貼壁細胞去除培養基，用PBS洗后，1 mL RIPA裂解液（或其他哺乳動物細胞裂解液）加10-20 uL全能核酸酶，室溫或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，離心取上清即可進行下游實驗。
b.懸浮細胞離心收集后，在離心管中加1 mL RIPA裂解液（或其他哺乳動物細胞裂解液）加10-20 uL全能核酸酶，室溫或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，離心取上清即可進行下游實驗。
2）組織樣品：將30-100 mg動物或者植物組織研磨充分后，加入100-200 uL裂解液，同時加入加5-10 uL全能核酸酶，室溫或冰上孵育5-30 min，收集裂解液，離心取上清即可進行下游實驗。
3）大腸桿菌或者其他細菌：細菌離心收集后，用裂解液裂解或者研磨破碎后，每1 mL加1-5 uL全能核酸酶，室溫孵育30 min，收集裂解液，離心取上清即可進行下游實驗。
注：若溶液為高鹽溶液，偏酸性或者偏堿性，含有較高濃度的去垢劑、變性劑，應適當增加酶量或孵育時間。
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，有效期2年。若是打開包裝后并4℃放置超過一周，建議過濾除菌防止微生物污染。
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操
常見問題：
Q. 產品應如何稀釋？
A：正常建議稀釋比例(終濃度)為1:1000-1:20000，其中時間、溫度、稀釋比例為影響反應的正面因素。
Q. 產品能否可以減少用量？
A：如希望減少用量，可酌情提高反應溫度或延長時間。
Q. 使用該產品進行消化反應的抑制因子有哪些？
A：在含有以下物質的體系中，全能核酸酶的活性會降低50%或以上：>150 mM一價陽離子，>100 mM磷酸鹽，>100 mM硫酸銨，>100 mM鹽酸胍，>0.1% SDS，>1% Triton X-100，>1% Tween 20。
Q. 怎樣滅活全能核酸酶？如何去除？
A：采用EDTA螯合金屬離子會可逆地抑制全能核酸酶活性，條件會造成不可逆失活，例如100 mM NaOH，70℃處理30 min等。全能核酸酶可采用陰離子交換柱或氣相色譜法從目的產物中分離出去。
Q. 全能核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物是否兼容？
A：全能核酸酶與不含EDTA的蛋白酶抑制劑混合物兼容。若含有EDTA且濃度>1 mM時，會抑制核酸酶活性，建議：如果必須加EDTA，按照2倍EDTA濃度補加Mg2+。
Q. 產品的用量是多少？
A：需要根據重懸菌體所需裂解液的體積來確定需要酶的量。若普通蛋白純化，則需要濃度為25 U/mL；核蛋白則需要100 U/mL；病毒表達蛋白純化需要濃度為12.5 U/mL；疫苗產品需要量為0.9-1.1 U/mL。
Q. 產品的穩定性如何，如果不小心在室溫放置幾天后，酶活性會受到怎樣的影響？
A：室溫2-3天，對活力影響不大。
Q. 全能核酸酶能在尿素環境消化核酸嗎？
A：全能核酸酶在尿素濃度為6 M時活性先增加，隨著時間延長活性又有降低；在尿素為7 M時，全能核酸酶15分鐘后出現變性并失活。但是在酶失活前多數核酸已經降解了。可通過提高全能核酸酶使用濃度補償7 M尿素的影響。
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