布氏錐尾線蟲PCR試劑盒組成及試劑配制:
1、 酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
產(chǎn)品名稱 規(guī)格 分類
布氏錐尾線蟲PCR試劑盒注意事項：建議加樣順序是陰性質(zhì)控品、待檢樣本、陽性質(zhì)控品。4. PCR擴增（擴增區(qū)）
1)      儀器設置（以ABI Prism 7500為例）
將PCR反應管放入PCR儀內(nèi)，按照對應順序設置陰性質(zhì)控品(NTC)、陽性質(zhì)控品(Standard)及待檢樣本(Unknown)。Reporter Dye為FAM，Quencher Dye為None，參比染料(Passive Reference)為 None。
2  ）    擴增程序
40Cycles
50℃ 10min
95℃ 3min
95℃ 10sec
60℃ 1min
60℃采集熒光信號，反應體系為25 μl。
【結果分析條件設定】
u 基線（Baseline）設定：應選擇該次實驗指數(shù)擴增前所有樣本熒光信號比較穩(wěn)定的一段區(qū)域（所有樣本熒光信號無較大波動），起始點（Start）應避開熒光采集起始階段的信號波動，終止點（End）應比早出現(xiàn)指數(shù)擴增的樣本Ct值減少1~3個循環(huán)，建議基線設為6~15。
u 閾值(Threshold)設定：將閾值線設定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴增曲線的點。
【質(zhì)控標準】
1.   陰性質(zhì)控品的檢測結果應為陰性，無指數(shù)擴增期，Ct=40或無Ct；
2.   陽性質(zhì)控品的檢測結果應為陽性，有明顯的指數(shù)擴增期，Ct值應小于等于35；
3.   以上要求需在一次實驗中同時滿足，否則該次實驗視為無效。
【結果判斷】
1.   陽性：有明顯的指數(shù)擴增期，且Ct＜38；
2.可疑：有明顯的指數(shù)擴增期，且38≤Ct<40，此時樣本為可疑樣本；對于可疑樣本建議復核一次，若復核結果Ct<40且有指數(shù)擴增期，則判定為陽性，否則判定為陰性；
3.   陰性：無指數(shù)擴增期，Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
【對檢驗結果的解釋】
1.   實驗室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染會出現(xiàn)假陽性結果；
2.   試劑運輸、保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，可能會導致出現(xiàn)假陰性結果。【試劑盒使用注意事項】
1.   有關實驗室管理規(guī)范請嚴格按照行業(yè)行政主管部門頒布的有關基因擴增檢驗實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。
2.   本試劑盒僅用于體外檢測。
3.   實驗請嚴格分區(qū)操作：
*區(qū)：PCR前準備區(qū) — 準備擴增所需試劑；
第二區(qū)：樣本處理區(qū) — 待測樣本和對照品處理；
第三區(qū)：檢測區(qū) — PCR擴增檢測。
4.   各區(qū)物品均為，不得交叉使用，避免污染，實驗后即請清潔工作臺；
5.   試劑盒內(nèi)各試劑使用前，充分融化后請稍事離心。
6.   在－20℃保存的樣本裂解產(chǎn)物，應在加樣前置室溫解凍，作短暫離心后使用。
7.   分裝有反應液的檢測板或裝入密實袋內(nèi)再轉移至樣本區(qū)。
8.   加樣時應使樣品*落入反應液中，不應有樣品粘附于管壁上，加樣后應盡快封上封板膜。
9.   擴增完畢立即取出檢測板，密封在塑料袋內(nèi)，丟棄于地點。
10.   反應液分裝時應盡量避免產(chǎn)生氣泡，上機前注意檢查各反應管是否蓋緊，以免熒光物質(zhì)泄露污染儀器。
11.   實驗中用過的吸頭請直接打入盛有1%次的廢物缸內(nèi)，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。
12.   工作臺及各物品定期用1%次、75%酒精或紫外燈進行消毒。