霍亂弧菌弧菌O1型PCR試劑盒組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產(chǎn)品名稱 規(guī)格 分類
霍亂弧菌弧菌O1型PCR試劑盒注意事項:建議加樣順序是陰性質(zhì)控品、待檢樣本、陽性質(zhì)控品。4. PCR擴(kuò)增(擴(kuò)增區(qū))
1) 儀器設(shè)置(以ABI Prism 7500為例)
將PCR反應(yīng)管放入PCR儀內(nèi),按照對應(yīng)順序設(shè)置陰性質(zhì)控品(NTC)、陽性質(zhì)控品(Standard)及待檢樣本(Unknown)。Reporter Dye為FAM,Quencher Dye為None,參比染料(Passive Reference)為 None。
2 ) 擴(kuò)增程序
40Cycles
50℃ 10min
95℃ 3min
95℃ 10sec
60℃ 1min
60℃采集熒光信號,反應(yīng)體系為25 μl。
【結(jié)果分析條件設(shè)定】
u 基線(Baseline)設(shè)定:應(yīng)選擇該次實驗指數(shù)擴(kuò)增前所有樣本熒光信號比較穩(wěn)定的一段區(qū)域(所有樣本熒光信號無較大波動),起始點(Start)應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號波動,終止點(End)應(yīng)比早出現(xiàn)指數(shù)擴(kuò)增的樣本Ct值減少1~3個循環(huán),建議基線設(shè)為6~15。
u 閾值(Threshold)設(shè)定:將閾值線設(shè)定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴(kuò)增曲線的點。
【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】
1. 陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陰性,無指數(shù)擴(kuò)增期,Ct=40或無Ct;
2. 陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陽性,有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,Ct值應(yīng)小于等于35;
3. 以上要求需在一次實驗中同時滿足,否則該次實驗視為無效。
【結(jié)果判斷】
1. 陽性:有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,且Ct<38;
2.可疑:有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,且38≤Ct<40,此時樣本為可疑樣本;對于可疑樣本建議復(fù)核一次,若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴(kuò)增期,則判定為陽性,否則判定為陰性;
3. 陰性:無指數(shù)擴(kuò)增期,Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
【對檢驗結(jié)果的解釋】
1. 實驗室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
2. 試劑運輸、保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,可能會導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。【試劑盒使用注意事項】
1. 有關(guān)實驗室管理規(guī)范請嚴(yán)格按照行業(yè)行政主管部門頒布的有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。
2. 本試劑盒僅用于體外檢測。
3. 實驗請嚴(yán)格分區(qū)操作:
*區(qū):PCR前準(zhǔn)備區(qū) — 準(zhǔn)備擴(kuò)增所需試劑;
第二區(qū):樣本處理區(qū) — 待測樣本和對照品處理;
第三區(qū):檢測區(qū) — PCR擴(kuò)增檢測。
4. 各區(qū)物品均為,不得交叉使用,避免污染,實驗后即請清潔工作臺;
5. 試劑盒內(nèi)各試劑使用前,充分融化后請稍事離心。
6. 在-20℃保存的樣本裂解產(chǎn)物,應(yīng)在加樣前置室溫解凍,作短暫離心后使用。
7. 分裝有反應(yīng)液的檢測板或裝入密實袋內(nèi)再轉(zhuǎn)移至樣本區(qū)。
8. 加樣時應(yīng)使樣品*落入反應(yīng)液中,不應(yīng)有樣品粘附于管壁上,加樣后應(yīng)盡快封上封板膜。
9. 擴(kuò)增完畢立即取出檢測板,密封在塑料袋內(nèi),丟棄于地點。
10. 反應(yīng)液分裝時應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡,上機(jī)前注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊,以免熒光物質(zhì)泄露污染儀器。
11. 實驗中用過的吸頭請直接打入盛有1%次的廢物缸內(nèi),并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。
12. 工作臺及各物品定期用1%次、75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒。
霍亂弧菌弧菌O1型PCR試劑盒
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- 公司名稱上海雅吉生物科技有限公司
- 品 牌
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- 所 在 地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時間2019/6/12 9:34:22
- 訪問次數(shù)108
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雅吉生物的試劑盒,在國內(nèi)眾多重點實驗室廣泛使用,深受廣大科研人員好評,先后在各雜志文章中被引用,歡迎選購。公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時,也建立了一套多部門聯(lián)動服務(wù)體系,努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個客戶。
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