霍亂弧菌弧菌O1型染料法熒光定量PCR試劑盒組成及試劑配制:
1、 酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
產品名稱 規格 分類
霍亂弧菌弧菌O1型染料法熒光定量PCR試劑盒注意事項：建議加樣順序是陰性質控品、待檢樣本、陽性質控品。4. PCR擴增（擴增區）
1)      儀器設置（以ABI Prism 7500為例）
將PCR反應管放入PCR儀內，按照對應順序設置陰性質控品(NTC)、陽性質控品(Standard)及待檢樣本(Unknown)。Reporter Dye為FAM，Quencher Dye為None，參比染料(Passive Reference)為 None。
2  ）    擴增程序
40Cycles
50℃ 10min
95℃ 3min
95℃ 10sec
60℃ 1min
60℃采集熒光信號，反應體系為25 μl。
【結果分析條件設定】
u 基線（Baseline）設定：應選擇該次實驗指數擴增前所有樣本熒光信號比較穩定的一段區域（所有樣本熒光信號無較大波動），起始點（Start）應避開熒光采集起始階段的信號波動，終止點（End）應比早出現指數擴增的樣本Ct值減少1~3個循環，建議基線設為6~15。
u 閾值(Threshold)設定：將閾值線設定在剛好超過正常陰性質控品擴增曲線的點。
【質控標準】
1.   陰性質控品的檢測結果應為陰性，無指數擴增期，Ct=40或無Ct；
2.   陽性質控品的檢測結果應為陽性，有明顯的指數擴增期，Ct值應小于等于35；
3.   以上要求需在一次實驗中同時滿足，否則該次實驗視為無效。
【結果判斷】
1.   陽性：有明顯的指數擴增期，且Ct＜38；
2.可疑：有明顯的指數擴增期，且38≤Ct<40，此時樣本為可疑樣本；對于可疑樣本建議復核一次，若復核結果Ct<40且有指數擴增期，則判定為陽性，否則判定為陰性；
3.   陰性：無指數擴增期，Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
【對檢驗結果的解釋】
1.   實驗室環境污染、試劑污染、樣品交叉污染會出現假陽性結果；
2.   試劑運輸、保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，可能會導致出現假陰性結果。【試劑盒使用注意事項】
1.   有關實驗室管理規范請嚴格按照行業行政主管部門頒布的有關基因擴增檢驗實驗室的管理規范執行。
2.   本試劑盒僅用于體外檢測。
3.   實驗請嚴格分區操作：
*區：PCR前準備區 — 準備擴增所需試劑；
第二區：樣本處理區 — 待測樣本和對照品處理；
第三區：檢測區 — PCR擴增檢測。
4.   各區物品均為，不得交叉使用，避免污染，實驗后即請清潔工作臺；
5.   試劑盒內各試劑使用前，充分融化后請稍事離心。
6.   在－20℃保存的樣本裂解產物，應在加樣前置室溫解凍，作短暫離心后使用。
7.   分裝有反應液的檢測板或裝入密實袋內再轉移至樣本區。
8.   加樣時應使樣品*落入反應液中，不應有樣品粘附于管壁上，加樣后應盡快封上封板膜。
9.   擴增完畢立即取出檢測板，密封在塑料袋內，丟棄于地點。
10.   反應液分裝時應盡量避免產生氣泡，上機前注意檢查各反應管是否蓋緊，以免熒光物質泄露污染儀器。
11.   實驗中用過的吸頭請直接打入盛有1%次的廢物缸內，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。
12.   工作臺及各物品定期用1%次、75%酒精或紫外燈進行消毒。