人間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化試劑盒
產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品簡介
人間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化試劑盒是埃澤思生物（Applied Cell®）自主研發(fā)的一款用于人間充質(zhì)干細(xì)
胞誘導(dǎo)成骨分化的產(chǎn)品，可用于骨.髓、臍帶、脂肪等組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)成骨分化
產(chǎn)品特性
? 誘導(dǎo)分化程序簡單便捷。
? 誘導(dǎo)成骨細(xì)胞效率高。
產(chǎn)品內(nèi)容
相關(guān)材料
• Xeno-Free 人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基（Applied Cell®:AC-1001003）
• 人間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化試劑盒（Applied Cell®:AC-1001027）
• 成骨檢測染液（Applied Cell®:AC-1001021）
• 細(xì)胞消化液（Applied Cell®:AC-1001024）
• 磷酸鹽緩沖液(1×) （Applied Cell®: Cat.AC-1001037）
實驗準(zhǔn)備
人間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化培養(yǎng)基配制：
1. 2-8℃解凍人間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化添加劑，輕晃搖勻；
2. 隨后將添加劑加入到人間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基中（添加劑 10mL 與 90mL 基礎(chǔ)培養(yǎng)基徹.底
混合）混勻，即為人間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化培養(yǎng)基。人間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化培養(yǎng)基可在 2-8℃穩(wěn)定儲存 2-3 周。
注意：人間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化添加劑只能在 2-8℃解凍，待添加劑加入到培養(yǎng)基以后，請用培養(yǎng)基
潤洗添加劑試管 1-2 次，因添加劑量較少可防止添加劑粘附在試管壁上造成損失。
實驗操作
1. 誘導(dǎo)成骨（以 6 孔板為例）
1.1. 使用細(xì)胞細(xì)胞包被液包被細(xì)胞培養(yǎng)板，將傳代或復(fù)蘇凍存的人間充質(zhì)干細(xì)胞接種到 6 孔板上，密度為 2×105 -3×105 cells/cm2 或 2×105 -3×105 cells/孔，置于 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞匯合度達到 80%-90%時，小心的將孔內(nèi)人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基吸掉，向 6 孔板中加入 2 mL 人間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化培養(yǎng)基,以此記為第 0 天；
注意：成骨分化容易使細(xì)胞卷起，，成骨分化時應(yīng)使用包被液包被細(xì)胞培養(yǎng)板。
1.2. 每隔 1-2 天更換新鮮的人間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化培養(yǎng)基；
注意：為防止成骨細(xì)胞脫落，建議成骨過程中出現(xiàn)大量鈣結(jié)節(jié)之后，換液形式變?yōu)槊刻煲淮伟肓繐Q液。
1.3. 誘導(dǎo) 14-21 天期間，視細(xì)胞的形態(tài)變化及生長情況（如圖 1 所示），可用成骨檢測染液（AppliedCell:AC-1001021）
進行染色。
成骨檢測染液染色
2.1. 誘導(dǎo)成骨分化結(jié)束后，吸掉 6 孔板中的成骨分化培養(yǎng)基，用 PBS 沖洗 1-2 次。每孔加入 1 mL細(xì)胞固定液，
固定 10~30 min；
2.2. 吸掉細(xì)胞固定液，PBS 沖洗 2 次。每孔加入 2 mL 成骨檢測染液，染色 3-5 min；
2.3. 吸掉成骨檢測染液，用 PBS 沖洗 2-3 次；
2.4. 將培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察成骨染色效果（如圖 2 所示）。
