HCCLM3人肝癌細胞(高轉)養基生產和使用常見問題
1.低血清培養基能用肉眼判斷其pH值嗎?
答:低血清培養基中酚紅的含量與普通培養基中的酚紅含量不同,不能通過肉眼觀察或通過經驗來判定pH值,建議使用pH計進行測定。
2.低血清培養基的緩沖系統是什么?
答:平衡鹽一般是由無機鹽及葡萄糖組成的。平衡鹽有Hanks′系統、Earle′s系統、Dulbecco′s磷酸緩沖鹽系統等。199系列培養基、MEM系列培養基均有Hanks′系統的培養基及Earle′s系統的培養基。但是有些培養基均不是以上常規的平衡鹽系統,例如RPMI 1640培養基、F12培養基。MEM(SLM)低血清培養基的平衡鹽系統也不是常規的平衡鹽系統,該平衡鹽系統的緩沖能力強于常規平衡鹽系統的緩沖能力。
3.谷氨酰胺溶液和碳酸氫鈉的配制方法是什么?
答:以0.2mol/L的 L-谷氨酰胺配制為例:稱取L-谷氨酰胺2.92g,加注射用水100ml,充分攪拌混勻。用0.2μm濾膜正壓過濾除菌。溶液應在4℃下避光保存,2周內使用。以7.5% NaHCO3的配制為例:稱取NaHCO37.5g溶于100ml蒸餾水中過濾除菌。
4.什么培養基中可以省去加酚紅?
答:酚紅在培養基中用作pH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。酚紅本身對生物制品質量并不會產生影響,可以通過純化技術去除,但酚紅在無血清培養基可能帶來胞內鈉/鉀失衡,影響細胞生長,當然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅并不是培養基中必需的一種成分,很多國外的疫苗或抗體生產企業在生產過程中都使用無酚紅培養基。
5.放置在冰箱中的培養基顏色會發生變化,為什么?
答:培養基保存于4℃冰箱中,培養基內CO2 會逐漸溢出,造成培養基越來越偏堿性。而培養基中酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿后再用于細胞培養將造成細胞生長停滯或死亡。培養基偏堿時,可以通入無菌過濾的CO2,以調整pH值。
6.無血清培養與有血清培養使用的抗生素量一樣嗎?
答:當在無血清培養基中添加抗生素時,降低至少在有血清培養基中所使用濃度的50%。因為血清中的蛋白會結合和滅活一些抗生素。而在無血清培養條件下,抗生素不被滅活。
7.培養基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?
答:一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
8.什么是個性化培養基?它有什么優點?
答:根據細胞類型、培養方式和生產工藝等特點所定制的培養基,即個性化培養基。個性化培養基在國外生物制藥企業被普遍采用,個性化培養基可以為細胞生長提供充足的營養物質,能提高細胞的生長速率、培養密度、以及延長細胞維持時間;也可以為細胞生長提供均衡的營養供給,減少細胞有害代謝物質的積累,降低對細胞生長的危害;同時對貼壁細胞而言,能增加細胞的貼壁性,并降低培養過程中剪切力對細胞的損傷;個性化培養基可以根據各戶的特殊需求減少或不使用動物源成分,從而使生物制品安全性更有保障。
HCCLM3人肝癌細胞(高轉)培養基偶然被凍,可否繼續使用?
答:如果細胞培養基偶然被凍,您應該自然溶解培養基并觀察是否有沉淀產生。如果沒有沉淀產生,培養基可以正常使用,如果出現沉淀,只能丟棄這些培養基。
10.細胞冷凍培養基之成份為何?
答:動物細胞冷凍保存時常使用的冷凍培養基是含5 - 10%DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95%原來細胞生長用的新鮮培養基均勻混合。注意:由于DMSO稀釋時會放出大量熱能,故不可將DMSO直接加入細胞液中,必須使用前先行配制完成。
11.培養基及其它添加物和試劑可反復凍融嗎?
答:大部分添加物和試劑多可以凍融3次,如果次數過多會將使含有的蛋發生降解和沉淀,這將會影響它的性能。
12.液體培養基的保存是冷藏好?還是冷凍好?
答:要冷藏!!通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個月到一年。
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