人核糖體蛋白L22(RPL22)ELISA試劑盒 實驗材料與試劑配制:
1.儀器與材料:酶標儀(使用前預熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。
2. 洗液的配制:按1:30的比例配制洗液備用。
人核糖體蛋白L22(RPL22)ELISA試劑盒 樣品收集、處理及保存
1).細胞培養上清:
適用于檢測體外培養的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
2)細胞:
用PBS反復洗滌細胞3次,調整細胞濃度達到104-106/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。
3)血清:
在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。
4)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
5)體液:
包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
6.)組織標本:
切取組織標本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。
樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
7)保存:
如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-70 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
人核糖體蛋白L22(RPL22)ELISA試劑盒 操作步驟:
1)取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。
2)分組:取出96孔板,根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數,把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準品組(6個濃度)、空白孔、待測樣品組。
3)標準品的稀釋:準備小試管6 只,依次編好號碼,先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul,然后取原濃度標準品100ul 加入一只已編好號的試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第三只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第五只試管中,充分混勻;然后在該試管中取100ul,棄掉。第六只試管作為0 號標準品。
注:為減少實驗誤差,保證準確性,建議設置復孔。
4)加樣:依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入50ul的蒸餾水;其余微孔中先加樣品40ul然后再加*標記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
5)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
6)洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒棄去,如此重復5 次,拍干。
7)加酶標溶液:標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液(空白對照孔除外)。
8)溫育:酶標板用封板紙密封后,放入濕盒內于37℃恒溫孵育1小時。
9)洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標板5次,用吸水紙*拍干。
10)顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。
11)終止:25-37℃下避光反應10-15分鐘,加入50ul終止液。
12)讀板:在450nm波長讀取各孔的OD值。
注:讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時間控制在終止反應后的30分鐘內,以免影響準確性。
人核糖體蛋白L22(RPL22)ELISA試劑盒數據計算:
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,即為樣品的實際濃度。
人核糖體蛋白L22(RPL22)ELISA試劑盒注意事項:
1)實驗操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。
2)加樣:加樣時,要控制加樣速度,避免*孔與后一孔間的時間間隔過大,否則將會導致不同的預孵育時間,從而影響實驗的準確性以及重復性。
3)孵育:嚴格按照說明書上規定的孵育時間和溫度進行。
反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化,如果顏色較深,請提前加入終止液終止反應。
4)建議實驗前預測樣品含量,如樣品濃度過高,應對樣品進行稀釋,計算結果時乘以相應的稀釋倍數。
5)建議使用本試劑盒時先做預實驗(即先做標準曲線,試用幾個標本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經銷商協商,如果因運輸過程導致試劑盒失效,可要求調換,但概不承擔產品本身以外的任何損失。
七.保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:2-8℃
2.有效期:6個月
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人核糖體蛋白L22(RPL22)ELISA試劑盒 產品信息
關鍵詞:酶標儀