.佛山市藥物結(jié)構(gòu)確認(rèn)及雜質(zhì)分析-中科院CMA

佛山市藥物結(jié)構(gòu)確認(rèn)及雜質(zhì)分析-中科院CMA

MRM 技術(shù)在蛋白質(zhì)與RNA 相互作用研究中的應(yīng)用蛋白質(zhì)- R N A 復(fù)合物在調(diào)控真核細(xì)胞的基因表達(dá)上具有重要意義。基于M S 的方法研究蛋白質(zhì)與R N A 的相互作用多有報(bào)道，而采用M R M 與其他技術(shù)相結(jié)合的方法，能更深入地研究蛋白質(zhì)與RNA 作用的結(jié)構(gòu)域，得到更豐富的相互作用結(jié)構(gòu)信息。其原理是：通過母離子掃描的模式，獲得含有磷酸碎片的所有多肽離子的準(zhǔn)確分子量和電荷數(shù)。設(shè)計(jì)MRM 離子對(duì)，母離子掃描獲得的信號(hào)離子作為母離子，子離子設(shè)定為堿基序列AUGC ，在MRM 的檢測(cè)域值達(dá)到設(shè)定值后，進(jìn)行高分辨增強(qiáng)子離子掃描, 終獲取蛋白質(zhì)序列信息和與其作用的R N A 序列信息。Lenz 等[17]采用此方法，研究了U1SnRNP 和1515K-61K-U4atacSnRN 與RNA 的相互作用信息，分別用*和R N A 酶T 1、A 對(duì)蛋白質(zhì)和R N A 進(jìn)行酶切，得到相互作用的短肽段和RNA 的短序列，在負(fù)離子模式進(jìn)行母離子掃描，依據(jù)獲得的結(jié)果設(shè)計(jì)MRM 母- 子離子對(duì)，在正離子模式進(jìn)行MRM-子離子增強(qiáng)掃描，后得到了相互作用結(jié)構(gòu)域等更為詳細(xì)的信息。

2、碳（¹³C）譜、DEPT譜

掃描譜寬249.0716Hz (250 ppm)，打印譜寬20551.725Hz (215ppm)。

DEPT譜輔助碳譜解析如下：δ 22.20為3位、4位的CH₂ 碳峰，δ 50.28為5位（或7位）的CH₂ 碳峰，δ 50.51為7位（或5位）的CH₂ 碳峰，δ 23.57為1'位的CH₃碳峰, 1位和2位的CH碳峰（δ 39.63）藏在DMSO溶劑峰中，δ74.13為2'位的CH碳峰，δ 192.27為3'位的羰碳峰。數(shù)據(jù)見附表2。

2、碳（¹³C）譜、DEPT譜

掃描譜寬249.0716Hz (250 ppm)，打印譜寬20551.725Hz (215ppm)。

DEPT譜輔助碳譜解析如下：δ 22.20為3位、4位的CH₂ 碳峰，δ 50.28為5位（或7位）的CH₂ 碳峰，δ 50.51為7位（或5位）的CH₂ 碳峰，δ 23.57為1'位的CH₃碳峰, 1位和2位的CH碳峰（δ 39.63）藏在DMSO溶劑峰中，δ74.13為2'位的CH碳峰，δ 192.27為3'位的羰碳峰。數(shù)據(jù)見附表2。

2、碳（¹³C）譜、DEPT譜

掃描譜寬249.0716Hz (250 ppm)，打印譜寬20551.725Hz (215ppm)。

DEPT譜輔助碳譜解析如下：δ 22.20為3位、4位的CH₂ 碳峰，δ 50.28為5位（或7位）的CH₂ 碳峰，δ 50.51為7位（或5位）的CH₂ 碳峰，δ 23.57為1'位的CH₃碳峰, 1位和2位的CH碳峰（δ 39.63）藏在DMSO溶劑峰中，δ74.13為2'位的CH碳峰，δ 192.27為3'位的羰碳峰。數(shù)據(jù)見附表2。

儀器名稱及型號(hào)：超導(dǎo)脈沖付里葉變換核磁共振譜儀

                德國 Bruker  DRX-400

溶劑：CDCl₃