河源市藥物結構確認及雜質分析-CMA資質
NMR（核磁共振）測試
儀 器：德國 Bruker DRX- 400 ，400MHz超導脈沖付里葉變換核磁共振譜儀；
測試條件：溶 劑： CDCl3
參 考 物： TMS
溫 度： 20ºC
頻 率： 1H譜：400.130MHz；13C譜：100.613MHz
測試結果：樟腦樣品（批號為：Yz1408019）經核磁共振氫（1H）譜、碳（13C）譜、DEPT（DEPT135和DEPT90）譜、1H-1H COSY譜、13C-1H COSY譜、HMBC譜分析，確認該樣品與樟腦（即1,7,7-*基二環[2,2,1]庚烷-2-酮）的化學結構（見結構圖）相符。
5. MRM 技術在定量蛋白質組學研究中的應用復雜組分共流出物的干擾和寬達9 個數量級以上的動態范圍，一直是影響血清或血漿等生物體液中蛋白質、多肽準確定量的關鍵因素。盡管研究者們也嘗試采用多種方法，包括盡可能充分的色譜分離，去除高豐度蛋白質等，但質譜對低豐度蛋白質
的檢測靈敏度和精密度仍不能滿足分析的要求。M R M 技術在定量蛋白質組學應用上展現了其方法
的優點。首先，在一定程度上提高了測定的動態范圍，其原因一方面是因為對離子的選擇檢出，降低了復雜組分的背景信號，增強了一些低豐度蛋白質的檢測靈敏度；另一方面通過對高豐度、低豐度蛋白質M R M 離子對的選擇來均衡兩者的響應信號差異。例如，對高豐度蛋白質，選擇響應豐度較低的母離子- 子離子對；對低豐度蛋白質，選擇響應程度較高的母離子- 子離子對，從而均衡高、低豐度的信號差異。其次，減少了復雜組分共流出物的干擾，增強了檢測的特異性。此外，MRM 技術高通量的特點，也為多種蛋白質的同時定量提供了條件。M R M 技術通過與同位素稀釋法或m T R A Q 技術結合，對已知量加入的內標肽段和樣本中的真實肽段分別進行標記，選擇不同母- 子離子對獲得不同的色譜檢出信號，比較兩者信號，從而產生定量結果[12,13]。
Anderson 等[14]用MRM 技術定量分析了人體血漿中53 種高、中豐度蛋白質。其中47 個數據同批變異系數為2%～22%，顯示了定量的良好精密度。分析結果的動態范圍達到4.5 個數量級。Lin 等[15]用M R M 定量測定了人體血漿中中等豐度蛋白質的實際濃度。測定結果表明其濃度范圍達到了3～700 nmol/L。12 次反復測量變異系數(CV)值小于25%。對于血漿中的低豐度蛋白質，Keshishian 等[16]也采用MRM 和同位素稀釋的方法進行了定量分析。在未進行蛋白質或多肽親和富集的條件下，去除血漿6 種高豐度蛋白質后，低豐度蛋白質的檢測限在1～10 mg/L，CV值在3%～15%，與質譜直接檢測血漿蛋白的方法相比，分析性能改善了1000 倍。實驗結果顯示了這種MRM 技術進行定量的高精密度，以及用于分析復雜樣本的高動態范圍。
6. MRM 技術在蛋白質與RNA 相互作用研究中的應用蛋白質- R N A 復合物在調控真核細胞的基因表達上具有重要意義。基于M S 的方法研究蛋白質與R N A 的相互作用多有報道，而采用M R M 與其他技術相結合的方法，能更深入地研究蛋白質與RNA 作用的結構域，得到更豐富的相互作用結構信息。其原理是：通過母離子掃描的模式，獲得含有磷酸碎片的所有多肽離子的準確分子量和電荷數。設計MRM 離子對，母離子掃描獲得的信號離子作為母離子，子離子設定為堿基序列AUGC ，在MRM 的檢測域值達到設定值后，進行高分辨增強子離子掃描, 終獲取蛋白質序列信息和與其作用的R N A 序列信息。Lenz 等[17]采用此方法，研究了U1SnRNP 和1515K-61K-U4atacSnRN 與RNA 的相互作用信息，分別用*和R N A 酶T 1、A 對蛋白質和R N A 進行酶切，得到相互作用的短肽段和RNA 的短序列，在負離子模式進行母離子掃描，依據獲得的結果設計MRM 母- 子離子對，在正離子模式進行MRM-子離子增強掃描，后得到了相互作用結構域等更為詳細的信息。
7. 展望M R M 技術是基于蛋白質或多肽的已知信息或假定信息進行質譜信號采集，有針對性地獲取數據的方式。通過與其他質譜掃描技術的聯合使用，能在蛋白質組研究中充分展現其高靈敏度、高準確性、高重復性、高通量的應用優點。可以預見，通過對M R M 技術的進一步優化，例如優化M R M 母－子離子的選擇條件，從已有的蛋白質譜中人工獲取或利用軟件計算母- 子離子；優化每次運行MRM 離子對的數目，改善色譜峰形，或者通過設立不同時間段檢測離子對，增加分析通量；聯合其他多種質譜掃描技術，將使M R M 技術擁有更好的應用前景，更有效地滿足蛋白質組學的分析需求。
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