1)原理:JC-1是一種廣泛用于檢測(cè)線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential)△Ψm 的理想熒光探針。在線粒體膜電位較高時(shí),JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)(matrix)中,形成聚合物(J-aggregates),可以產(chǎn)生橙色熒光;在線粒體膜電位較低時(shí),JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中,此時(shí)JC-1為單體(monomer),可以產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測(cè)線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對(duì)比例來衡量線粒體去極化的比例。
?。?)材料與儀器
JC-1購(gòu)自Sigma公司,分子量652.23,用DMSO溶解,儲(chǔ)存濃度為5 mg/ml,終濃度稀釋成10 µg/ml; 熒光顯微鏡,多功能熒光酶標(biāo)儀
?。?)步驟
① 接種細(xì)胞:96孔板,接種細(xì)胞數(shù)為每孔1.5萬;或內(nèi)置蓋玻片的24孔板,每孔細(xì)胞數(shù)為9萬。
?、?處理:接種24小時(shí)后用有糖earle’s 液洗兩遍, 給予相應(yīng)處理(氧化應(yīng)激或藥物)。
③ JC-1孵育:用有糖earle’s 液洗1遍,并換上終濃度為10µg/ml JC-1培養(yǎng)箱孵育20 min.
?、?檢測(cè):用有糖earle’s 液洗2遍,蓋玻片可在熒光顯微鏡下檢測(cè)熒光變化,96孔板在多功能熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光值,檢測(cè)JC-1單體時(shí)激發(fā)光設(shè)置為488nm,發(fā)射光設(shè)置為530nm;檢測(cè)JC-1聚合物時(shí),激發(fā)光設(shè)置為529nm,發(fā)射光設(shè)置為590nm
?。?)注意點(diǎn)
稀釋JC-1時(shí)要迅速,否則易聚集,不易溶解;建議用碧云天的JC-1線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒。
線粒體膜電位檢測(cè)服務(wù) 實(shí)驗(yàn)耗材
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- 公司名稱上海宸功生物技術(shù)有限公司
- 品 牌
- 型 號(hào)
- 所 在 地上海
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間2023/9/13 9:51:22
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